亞硝酸鹽暴露致海馬損傷和不孕效應(yīng)的研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物的海馬位于腦顳葉內(nèi)，是組成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在日常學(xué)習(xí)和記憶形成等生理過程中起到重要作用。亞硝酸鹽作為食品添加劑，人們?cè)谌粘Ｉ罱佑|的機(jī)率較高，并且，亞硝酸鹽作為小分子物質(zhì)，可透過胎盤屏障，會(huì)對(duì)胎兒產(chǎn)生影響?；诤ｑR重要的生理功能，我們對(duì)孕期亞硝酸鹽暴露是否會(huì)對(duì)仔鼠海馬造成損傷進(jìn)行了研究。同時(shí)，在建模的過程中，通過實(shí)驗(yàn)手段探討了亞硝酸鹽的不孕效應(yīng)。
　　目的：①探討孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)仔鼠海馬損傷的作用；②探討亞硝酸鹽的

2、不孕效應(yīng)。
　　方法：①孕期亞硝酸鹽暴露模型的建立：將孕鼠分為對(duì)照組（生理鹽水）、低劑量亞硝酸鹽組（60 mg/kg）和高劑量亞硝酸鹽組（120 mg/kg）。收集P0（postnatal day0）、P7（postnatal day7）、P14（postnatal day14）、P30（postnatal day30）各年齡點(diǎn)仔鼠大腦，用于免疫組織熒光染色、彗星實(shí)驗(yàn)、Western blotting蛋白半定量分析，以對(duì)海馬損傷進(jìn)

3、行研究；②雌鼠亞硝酸鹽暴露模型的建立：將雌鼠也分為對(duì)照組、低劑量亞硝酸鹽組、高劑量亞硝酸鹽組，然后對(duì)亞硝酸鹽暴露后雌鼠的不孕率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；收集對(duì)照組和暴露組卵巢，用HE染色法觀察卵巢內(nèi)部結(jié)構(gòu)及各級(jí)卵泡數(shù)目的變化；用TUNEL試劑盒和Western blotting蛋白半定量分析對(duì)卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：①孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)仔鼠海馬損傷的影響：不論是暴露組還是對(duì)照組，仔鼠齒狀回增殖的神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)目均隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸減

4、少；在 P0、P7、P14和P30年齡點(diǎn)，暴露組仔鼠增殖的神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量明顯比對(duì)照組少，且具有劑量依賴性（P<0.05，n=96），為了鑒別這種抑制作用是否具有選擇性，我們對(duì)P0仔鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖情況進(jìn)行了觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)暴露組室管膜下區(qū)的神經(jīng)干細(xì)胞增殖較對(duì)照組也減少，同樣具有劑量依賴性（P<0.05）；暴露組仔鼠發(fā)生了氧化應(yīng)激且門區(qū)凋亡細(xì)胞的數(shù)目比對(duì)照組多，具有劑量依賴性（P<0.05）；彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：暴露組P0仔鼠海

5、馬細(xì)胞的彗尾比對(duì)照組長(zhǎng)，具有劑量依賴性(P<0.01)；與對(duì)照組P0仔鼠相比，暴露組仔鼠海馬組織內(nèi)Caspase8和NF-κB蛋白的表達(dá)量較高（P<0.05）；②亞硝酸鹽暴露的不孕效應(yīng)：亞硝酸鹽暴露可致不孕且具有劑量依賴性(P<0.05，n=66)；亞硝酸鹽暴露可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)、可使卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞凋亡增加（P<0.01，n=20）。
　　結(jié)論：①孕期亞硝酸鹽暴露可通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、抑制神經(jīng)干細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡而對(duì)仔鼠