二氫楊梅素治療小鼠葡聚糖硫酸鈉結(jié)腸炎療效及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　觀察二氫楊梅素治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效并探討其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　1.采取隨機(jī)數(shù)字表法將60只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為6組，分別為：正常組、模型組、DHM低劑量組、中劑量組、高劑量組和5-氨基水楊酸對(duì)照組，每組各10只小鼠。
　　2.于分組當(dāng)日給予正常組小鼠蒸餾水自行飲用，其余組小鼠給予4％DSS水溶液自行飲用（記為第1天），連續(xù)飲用7日。于飲用4%DSS水溶液當(dāng)日開(kāi)始，對(duì)DHM低劑量組（

2、50mg/kg/d）、中劑量組（100mg/kg/d）、高劑量組（200mg/kg/d）及5-氨基水楊酸對(duì)照組（50mg/kg/d）按各組擬定劑量分別進(jìn)行灌胃治療,連續(xù)給藥14天。
　　3.從飲用4%DSS溶液第1日起，每天稱量小鼠體重，觀察小鼠活動(dòng)、毛色、大便的形狀、顏色以及精神狀態(tài)并記錄,根據(jù)每日記錄結(jié)果，對(duì)各組小鼠疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）進(jìn)行測(cè)評(píng)。
　　4.于給藥第14天采用頸椎脫位法處死實(shí)驗(yàn)小鼠，游離小鼠全結(jié)腸和脾臟，

3、肉眼觀察游離下來(lái)的小鼠結(jié)腸外觀，測(cè)量并記錄小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度、稱取脾臟重量并計(jì)算脾臟指數(shù)；HE染色后光學(xué)顯微鏡下觀察，并進(jìn)行小鼠結(jié)腸組織學(xué)評(píng)分；Western blot法檢測(cè)各組小鼠結(jié)腸組織中TLR2、TLR4的表達(dá)；EMSA檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中NF-κB的活性；ELISA法測(cè)定DHM治療前后腸組織炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-a、IL-6含量；試劑盒測(cè)定腸組織MPO、NO、SOD的活性變化。
　　結(jié)果：
　　1.DAI評(píng)分：與正

4、常組對(duì)比，模型組評(píng)分[（8.33±0.52）vs0]顯著增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.01）；DHM低劑量組、中劑量組、高劑量組與模型組相比[（7.86±1.21）、（6±0）、（4.57±0.53）、（4.71±0.49）vs（8.33±0.52）]均下降，其中DHM低劑量治療組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05），其余各組均具有顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.01）；DHM高劑量組與5-氨基水楊酸對(duì)照組之間[（4.71±0.49）vs（8.33±0

5、.52）]無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。
　　2.結(jié)腸長(zhǎng)度：與正常組對(duì)比，模型組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ p<0.05）；DHM各劑量組與模型組相比[（8.8±0.85）、（8.8±0.95）、（8.89±0.93）vs（7.77±0.43）]縮短延緩，比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；DHM高劑量組與5-氨基水楊酸對(duì)照組之間[（8.89±0.93）vs（8.56±1.13）]無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。

6、>　　3.脾臟指數(shù)：與正常組對(duì)比，模型組小鼠脾臟指數(shù)比較顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）；DHM各劑量組與模型組相比[（5.64±0.94）、（5.88±1.26）、（5.81±0.66）vs（7.01±0.96）]均下降，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；DHM高劑量組與5-氨基水楊酸對(duì)照組之間[（5.81±0.66）vs（5.59±1.78）]無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。
　　4.病理組織學(xué)評(píng)分：與正常組相比較，模型組

7、病理學(xué)評(píng)分升高，比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）；DHM各劑量組與模型組相比[（7.00±0.82），（4.85±0.69），（2.71±0.76）vs（7.33±0.52）]均下降，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；DHM高劑量組與5-氨基水楊酸對(duì)照組之間[（2.71±0.76）vs（2.29±0.76）]無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。
　　5.EMSA法檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中NF-κB的活性：與正常組相比，模型組小鼠結(jié)腸組織

8、NF-κB活性明顯升高（p<0.01）；DHM各劑量組對(duì)NF-κB均具有顯著的抑制作用（p<0.01）,而高劑量組與水楊酸對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）。
　　6.Western blot法檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中TLR2、TLR4的表達(dá)：與正常組相比，模型組小鼠結(jié)腸組織TLR2、TLR4蛋白表達(dá)水平明顯升高（p<0.01）；DHM各劑量組小鼠腸組織TLR-2、TLR-4蛋白表達(dá)水平均有所降低（p<0.05），其中DHM高

9、劑量組顯著抑制了腸組織中TLR-2、TLR-4的高表達(dá)（p<0.01），治療效果與5-氨基水楊酸相當(dāng)。
　　7.ELISA法檢測(cè)結(jié)腸組織炎性因子IL-1β、TNF-a、IL-6的含量：檢測(cè)結(jié)果顯示，模型組炎性因子IL-1β、TNF-a、IL-6的含量顯著升高，與正常組相比較，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.01）；DHM各組與模型組比較，炎性因子含量顯著下降，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而DHM高劑量組與5-氨基水楊酸對(duì)照組之間無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差

10、異（p>0.05）。
　　8.檢測(cè)MPO、NO、SOD的活性變化：與正常組相比，模型組中MPO、NO活性顯著升高（p<0.01），SOD活性顯著下降（p<0.01）；DHM各劑量組和5-氨基水楊酸對(duì)照組中SOD、MPO活性與模型組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），而NO活性與模型組相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；DHM高劑量組、5-氨基水楊酸對(duì)照組與模型組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　結(jié)論：