黃芪保心湯及有效成分丹酚酸B對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠心肌纖維化和TGF-β-smad通路的影響.pdf

1、擴(kuò)張型心肌病是一種以左或右心室或雙側(cè)心室進(jìn)行性擴(kuò)大，心室收縮功能減退為主要特征的心肌疾病，主要表現(xiàn)為心力衰竭、心律失常、栓塞等，病死率高。其發(fā)生發(fā)展核心的病理過(guò)程是心室重塑，心室重塑重要的病理變化是心肌纖維化。中醫(yī)藥對(duì)心肌纖維化的治療有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，黃芪保心湯是本課題組研制的治療擴(kuò)張型心肌病的方劑，前期臨床和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究表明黃芪保心湯可以改善擴(kuò)張型心肌病患者和大鼠心功能及相關(guān)指標(biāo)。本課題在前期研究基礎(chǔ)上，研究黃芪保心湯對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠心

2、肌纖維化和TGF-β/smad通路的影響。
　　目的:
　　1.體內(nèi)試驗(yàn)研究黃芪保心湯對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠心功能及心肌纖維化的影響，并初步探討對(duì)TGF-β/smad通路的影響。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)研究黃芪保心湯中有效成分丹酚酸B對(duì)心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原含量的影響，并初步探討對(duì)TGF-β/smad通路的影響。
　　方法:
　　1.體內(nèi)試驗(yàn):選取SD大鼠80只，分為兩組:空白對(duì)照組和模型組，模型組采用腹腔注射鹽酸

3、多柔比星的方法構(gòu)建擴(kuò)張型心肌病心衰大鼠模型。心臟彩超篩選出擴(kuò)張型心肌病心衰造模成功的大鼠，再分為5組:模型組，黃芪保心湯低劑量組;黃芪保心湯中劑量組，黃芪保心湯高劑量組，卡托普利組。給藥4周后再次行心臟彩超測(cè)量大鼠左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)、左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、左心室短軸縮短率(LVFS)，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)大鼠血清PICP、PIIINP的含量，蘇木素-伊紅(HE)和馬松(Masson)染色觀察心

4、肌形態(tài)和心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)心肌組織Galectin-3、CollogenⅠ、CollogenⅢ mRNA和免疫組化(IHC)檢測(cè)CollogenⅠ、CollogenⅢ，Western blot檢測(cè)心肌組織Galectin-3、TGF-β1、smad3蛋白表達(dá)的水平。
　　2.體外試驗(yàn):采用血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)原代心肌成纖維細(xì)胞，共分為空白對(duì)照組、血管緊張素Ⅱ組，丹酚酸B低劑量組，丹酚酸B中劑量組，丹酚酸

5、B高劑量組，纈沙坦陽(yáng)性藥物組。應(yīng)用CCK8法檢測(cè)心肌成纖維細(xì)胞的增殖情況，免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞Galectin-3表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)心肌成纖維細(xì)胞CollogenⅠ、CollogenⅢ mRNA和WesternBlot檢測(cè)細(xì)胞Galectin-3、TGF-β1和smad3蛋白表達(dá)的水平。
　　結(jié)果:
　　1.體內(nèi)試驗(yàn):大鼠心臟彩超提示黃芪保心湯各劑量組，卡托普利組較模型組LVESD、LVEDD、LVEF、LVFS均有

6、顯著差異(P＜0.05)，血清PICP、PIIINP水平均有降低(P＜0.05)，心肌組織病理學(xué)染色提示黃芪保心湯各劑量組，卡托普利組較模型組心肌纖維化程度減輕，CVF有不同程度降低(P＜0.05)，CollogenⅠ、CollogenⅢ mRNA表達(dá)不同程度降低(P＜0.05)，Galectin-3、TGF-β、smad3蛋白表達(dá)降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　2.體外試驗(yàn):丹酚酸B各劑量組，纈沙坦組與模型組比較，細(xì)

7、胞增殖率均有所下降，具有顯著差異(P＜0.05)，免疫熒光結(jié)果提示成纖維細(xì)胞Galectin-3表達(dá)水平均有降低(P＜0.05)，CollogenⅠ、CollogenⅢ mRNA表達(dá)不同程度降低(P＜0.05)，Galectin-3、TGF-β、smad3蛋白表達(dá)水平降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　黃芪保心湯可以改善擴(kuò)張型心肌病大鼠心功能及心肌纖維化，其作用機(jī)制可能與抑制TGF-β/smad通路有關(guān)。