FOXC1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及對細(xì)胞增殖和周期的影響.pdf

1、目的:FOXC1為FOX蛋白超家族的成員之一，過去對于FOXC1的功能的研究主要集中于胚胎發(fā)育與基因遺傳方面，而近期的研究發(fā)現(xiàn)FOXC1在腫瘤發(fā)生和發(fā)展的過程中起到了重要作用。目前，研究已證實(shí)FOXC1與乳腺癌、肺癌和肝癌等腫瘤的惡性程度密切相關(guān)，但在腎透明細(xì)胞癌(ccRCC)中的表達(dá)情況及其對腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用及相關(guān)機(jī)制尚無明確研究報(bào)道。本課題通過對腎透明細(xì)胞癌及其癌旁組織中FOXC1的表達(dá)進(jìn)行檢測分析，并通過在腎癌細(xì)胞系中敲低及過表

2、達(dá)FOXC1基因，觀測其增殖變化，以了解FOXC1在腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中的作用，并為臨床診斷治療腎透明細(xì)胞癌提供靶標(biāo)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:1.收集我院60例腎透明細(xì)胞癌患者術(shù)后腫瘤及對應(yīng)瘤旁冰凍標(biāo)本,進(jìn)行實(shí)時定量PCR(RT-PCR)實(shí)驗(yàn)、蛋白印跡(western-blot)實(shí)驗(yàn)及免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)(IHC)，分別在核酸及蛋白水平檢測FOXC1的表達(dá)量，并對這60例病例臨床資料進(jìn)行分析。2.通過RT-PCR及weste

3、rn-blot實(shí)驗(yàn)，檢測正常腎小管上皮細(xì)胞株HK2，腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株769-P，786-O，OSRC-2中FOXC1的表達(dá)量。3.通過RNA干擾技術(shù)，轉(zhuǎn)染FOXC1特異性干擾siRNA，下調(diào)細(xì)胞系786-O,769-P的FOXC1表達(dá)量，行平板克隆，MTS及細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)，觀察分析其增殖變化。4.通過構(gòu)建pLV-EGFP[1]-FOXC1過表達(dá)質(zhì)粒，包裝病毒，感染786-O，769-P細(xì)胞系，使其過表達(dá)FOXC1基因，通過平板克隆，MT

4、S及流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)，觀察分析其增殖變化。
　　結(jié)果:在腎透明細(xì)胞癌患者腫瘤冰凍標(biāo)本中mRNA水平比相對應(yīng)的瘤旁冰凍標(biāo)本中FOXC1表達(dá)有顯著下降(P＜0.05)。FOXC1在mRNA水平不同性別、年齡、及TNM分期等分析均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，2.在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系中成功轉(zhuǎn)染siRNA-FOXC1，F(xiàn)OXC1表達(dá)下調(diào)后平板克隆實(shí)驗(yàn)及MTS實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞增值增高(P＜0.05)，細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)顯示低表達(dá)FOXC1

5、組G1期細(xì)胞比例降低，S期細(xì)胞比例升高(P＜0.05)。細(xì)胞大量進(jìn)入S期從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。3.成功構(gòu)建pLV-EGFP-FOXC1質(zhì)粒，并在腎透明細(xì)胞系中構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)FOXC1細(xì)胞株。過表達(dá)FOXC1的細(xì)胞株在平板克隆實(shí)驗(yàn)及MTS實(shí)驗(yàn)中增值率降低(P＜0.05),細(xì)胞周期測定實(shí)驗(yàn)顯示質(zhì)粒組G1期細(xì)胞比例升高，細(xì)胞較少進(jìn)入S期，使S期細(xì)胞比例均降低(P＜0.05)，而G2期比例無顯著差異(P＞0.05)。細(xì)胞被阻滯于G1/S期而抑制細(xì)胞