小鹽芥C-,2-H-,2-類鋅指蛋白基因ThZF1的克隆及其功能研究.pdf

1、本研究采用EST策略并結(jié)合RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)技術，成功地從鹽生模式植物小鹽芥的幼苗葉片中克隆了一個G2H2類型的鋅指蛋白基因ThZF1。并對其表達特征，轉(zhuǎn)錄因子特性及轉(zhuǎn)基因植物中的功能進行了初步研究?！　⊙芯拷Y(jié)果表明，小鹽芥ThZF1cDNA編碼蛋白由276個氨基酸組成，推測其分子量為30kD，等電點8.27。它與擬南芥AZF2有最高的同源性，同源性達79％。推測的小鹽芥ThZF1蛋白

2、沒有跨膜區(qū)，為水溶性蛋白。它包含兩個C2H2鋅指結(jié)構(gòu)域，每個C2H2鋅指結(jié)構(gòu)域都具有植物特有的序列QALGGH，是典型的TFⅢA型鋅指蛋白。N端的B-Box可能是其核定位(NLS)序列，另外還發(fā)現(xiàn)了L-Box，DNL-Box等結(jié)構(gòu)序列?！　±肗orthern雜交和RT-PCR技術分析表達差異，結(jié)果表明ThZF1受干旱和鹽的誘導。GFP融合瞬時表達實驗顯示它定位于細胞核?！　hZF1有激活酵母HIS基因的作用，凝膠阻滯分析表明Th

3、ZF1能特異結(jié)合EP2元件序列。所有這些結(jié)果說明，ThZF1可能是一個EP2結(jié)合型轉(zhuǎn)錄因子，暗示它是一個潛在的植物轉(zhuǎn)錄因子。煙草瞬時表達實驗表明，ThZF1能誘導AtEPSP1：GUS的表達，說明它可能直接作用于EPSPs類下游基因的啟動子而調(diào)控后者的表達?！　榱诉M一步研究ThZF1的功能，用農(nóng)桿菌介導法將其基因轉(zhuǎn)入擬南芥，得到轉(zhuǎn)基因的擬南芥azf2突變體互補植株，并研究了轉(zhuǎn)基因互補植株與突變體和野生對照的生長以及對鹽和干旱的耐受性