紫花苜蓿和白花草木樨細胞融合技術研究.pdf

1、利用原生質融合進行優(yōu)良基因轉移是一種短期而且非常有效的生物技術。目前國內外利用此項技術對番茄、煙草、水稻等植物進行了大量的研究?，F(xiàn)已從許多種內、種間、屬間甚至亞科間的體細胞雜交獲得雜種細胞系或雜種植株。目前細胞融合技術已被廣泛用于牧草研究的許多領域，并在紫花苜蓿和其他牧草抗性育種、減少膨脹病危害、提高干物質消化率、生物可降解材料開發(fā)、生物土壤改良、生物疫苗及活性制劑等方面取得了進展和突破。但是利用草木樨進行原生質體融合的研究國內外未見報

2、道。本實驗建立了完整的紫花苜蓿、草木樨組培體系，并對紫花苜蓿、白花草木樨原生質體融合的條件進行了初步分析，主要結果如下： 1.以MS為基本培養(yǎng)基，通過調整激素濃度等培養(yǎng)條件，摸索出紫花苜蓿和草木樨組織培養(yǎng)體系的最佳培養(yǎng)基。紫花紫花苜蓿的最佳培養(yǎng)基：愈傷組織誘導最佳培養(yǎng)為MS+2，4-D3.0mg-L-1+6-BA0.3mg-L-1；草木樨的最佳培養(yǎng)基：愈傷誘導最佳培養(yǎng)基為MS+2，4-D1.5mg-L-1+6-BA0.3 mg-

3、L-1。 2.本研究對酶液最佳配方進行研究，得出分離紫花苜蓿原生質體酶液的組成以2％的纖維素酶、0.2％果膠酶、0.5％離析酶為好，產量可達1.9×107個/g,酶解時間為10h時原生質體的活力最大為60％；分離草木樨原生質體的酶液組成以2％的纖維素酶、0.3％果膠酶、1％離析酶為好，產量可達4.31×107個/g，酶解時間控制在15h時原生質體的火力最大為62.5％。 3.用不同濃度的IOA處理白花草木樨原生質體，得到