SiRNA干擾Sam68對乳腺癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響.pdf

1、目的：在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中利用siRNA下調(diào)乳腺癌細(xì)胞有絲分裂Src相關(guān)蛋白p68（src associated protein p68 in mitosis，Sam68）的表達(dá)，了解sam68對乳腺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）發(fā)生的影響作用。探索sam68能否成為乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移治療靶點(diǎn)，為乳腺癌治療尋找新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　細(xì)胞實(shí)驗(yàn)利用siRNA下調(diào)乳腺癌細(xì)胞中s

2、am68的表達(dá)，通過蛋白、基因水平檢測，觀察sam68表達(dá)降低是否會影響乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞EMT的發(fā)生，包括上皮標(biāo)志蛋白E-鈣粘蛋白（E-cadherin）與間質(zhì)標(biāo)志蛋白波形蛋白（vimentin）之間發(fā)生改變，細(xì)胞發(fā)生侵襲、遷移能力、抗死亡能力的改變。
　　方法：采用實(shí)時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測具有不同侵襲能力的乳腺癌細(xì)胞株中的sam68的表達(dá)情況；選擇表達(dá)最高的乳腺癌細(xì)胞株利用siRNA下調(diào)內(nèi)源性sam68

3、蛋白的表達(dá)；利用實(shí)時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)等檢測下調(diào)sam68蛋白是否能抑制乳腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT的改變。
　　結(jié)果：sam68蛋白在高侵襲性的間質(zhì)樣MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)， siRNA下調(diào)內(nèi)源性sam68蛋白后，EMT標(biāo)志的上皮樣蛋白E-cadherin表達(dá)升高，而間質(zhì)樣蛋白vimentin則表達(dá)降低，細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞的遷移和侵襲能力降低。
　　結(jié)論：sam68在高侵襲性乳腺癌細(xì)胞中高