膜電位對(duì)TrkB受體活性的調(diào)節(jié).pdf

1、TrkB(Tyrosine Receptor Kinase B)受體是腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BrainDerived Neurotrophic Factor，BDNF)的主要功能受體，也是一種受體酪氨酸激酶。BDNF與細(xì)胞表面的TrkB受體結(jié)合激活TrkB受體胞內(nèi)段的酪氨酸激酶，并使TrkB受體胞內(nèi)幾個(gè)特定的酪氨酸殘基發(fā)生白磷酸化而激活下游信號(hào)通路。BDNF/TrkB參與了活性依賴的突觸可塑性調(diào)節(jié)，即神經(jīng)元活性影響B(tài)DNF對(duì)神經(jīng)元的效應(yīng)。

2、神經(jīng)元的活性可以增強(qiáng)BDNF在活化神經(jīng)元或突觸中的合成和分泌，也可以增強(qiáng)TrkB受體在活化的神經(jīng)元或突觸中的上膜表達(dá)、BDNF誘導(dǎo)的內(nèi)吞、轉(zhuǎn)錄、運(yùn)輸和翻譯等過(guò)程，這些過(guò)程依賴于Ca2+信號(hào)通路。但關(guān)于膜電位對(duì)TrkB受體活性的調(diào)節(jié)及其BDNF對(duì)神經(jīng)元活性依賴性調(diào)節(jié)的機(jī)制還有很多未知。本論文就膜電位對(duì)TrkB受體磷酸化水平調(diào)節(jié)的機(jī)制做了詳細(xì)的研究。 (1)免疫印記(Western Blot)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大鼠海馬腦片中BDNF依賴的T

3、rkB受體磷酸化(P-TrkB)水平在高[K+]細(xì)胞外液處理時(shí)高于正常[K+]細(xì)胞外液處理時(shí)。高K+處理可以增加P-TrkB/TrkB的比值。 (2)將體外轉(zhuǎn)錄的TrkB受體mRNA在非洲爪蟾卵母細(xì)胞(沒(méi)有神經(jīng)元的電壓門控通道的表達(dá))中表達(dá)。通過(guò)western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)高[K+]細(xì)胞外液處理組P-TrkB/TrkB值是正常[K+]細(xì)胞外液處理組的257±56％。 (3)為了排除胞內(nèi)Ca2+信號(hào)對(duì)TrkB受體磷

4、酸化水平的影響，用BAPTA或者BAPTA-AM阻斷胞內(nèi)Ca2+信號(hào)。Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)高[K+]依然可以誘導(dǎo)TrkB受體磷酸化水平的升高，與沒(méi)有阻斷胞內(nèi)Ca2+信號(hào)時(shí)一致。 (4)這些結(jié)果強(qiáng)烈提示高[K+]誘導(dǎo)的去極化激活TrkB受體酪氨酸激酶而升高其磷酸化水平其機(jī)制可能是由于TrkB受體自身可以感受膜電位。為了更加直接說(shuō)明膜電位對(duì)TrkB受體活性調(diào)節(jié)的機(jī)制，用cut-open電壓鉗技術(shù)檢測(cè)TrkB受體是否具有