負壓封閉引流聯合含氧液沖洗治療人靜脈性潰瘍和兔創(chuàng)傷后慢性感染性創(chuàng)面的臨床與實驗研究.pdf

1、本研究以人下肢慢性靜脈性潰瘍創(chuàng)面及兔創(chuàng)傷后慢性感染性創(chuàng)面作為研究對象，分別進行試驗研究，進一步探討負壓封閉引流聯合含氧液沖洗對慢性創(chuàng)面的療效及機制;觀察該技術能否更顯著地提高創(chuàng)面組織局部氧分壓，促進創(chuàng)面組織毛細血管和成纖維細胞增生、膠原沉積，減輕感染及炎癥反應。
　　第一部分負壓封閉引流聯合含氧液沖洗對下肢慢性靜脈性潰瘍創(chuàng)面的影響
　　目的：
　　評估負壓封閉引流(VSD)聯合含氧液沖洗對下肢慢性靜脈性潰瘍創(chuàng)面肉芽組織

2、生長及創(chuàng)面組織中巨噬細胞活化的影響。
　　方法：
　　2010年12月-2014年7月，選擇筆者單位收治住院且符合納入標準的34例下肢慢性靜脈性潰瘍(CVLU)患者，按隨機數字表法分為單純VSD組(A組)11例，VSD+生理鹽水組（B組）11例，VSD+含氧液組（C組）12例。入院后創(chuàng)面給予大體觀察，然后清創(chuàng)，術中留取創(chuàng)面中心肉芽組織標本。術后A組僅行VSD治療（壓力值為-30～25kPa，下同）;B組采用VSD聯合生理鹽水

3、沖洗治療;C組采用VSD聯合含氧液沖洗(氧流量=1.0 L/min)治療。治療7d，拆除VSD，計算肉芽組織覆蓋率并留取創(chuàng)面中心肉芽組織標本。清創(chuàng)前及治療7d行創(chuàng)面大體觀察。取治療7d創(chuàng)面肉芽組織行HE染色、Masson染色組織病理學觀察，免疫組織化學染色法檢測血管內皮生長因子(VEGF)表達。清創(chuàng)后VSD治療前（以下簡稱治療前）及治療7d，用經皮氧分壓測定儀檢測創(chuàng)周皮膚局部氧分壓，免疫熒光染色分別觀察創(chuàng)面CD68與誘導型一氧化氮合酶(

4、iNOS)雙陽性（Ⅰ型巨噬細胞）、CD68與精氨酸酶1(Arg-1)雙陽性(Ⅱ型巨噬細胞)細胞并計數。對數據行Fisher確切概率法檢驗、單因素方差分析、LSD檢驗、配對t檢驗、協(xié)方差分析。
　　結果：
　　(1)創(chuàng)面大體情況
　　大體觀察顯示清創(chuàng)前3組患者創(chuàng)面均存在壞死組織，肉芽組織較少，分泌物較多。治療7d，3組患者創(chuàng)面以及周圍皮膚水腫均較前明顯消退，均出現新生肉芽組織，且C組創(chuàng)面新生肉芽組織最多，B組多于A組。<

5、br>　　(2)創(chuàng)面肉芽組織覆蓋率
　　治療7d，A、B、C組創(chuàng)面肉芽組織覆蓋率分別為（76.9±4.2）％、（85.0±2.8）％、（88.6±3.8）％，組間總體比較差異有統(tǒng)計學意義（F=30.73，P＜0.01）;C組高于A組、B組（P值分別小于0.01和小于0.05），B組高于A組(P＜0.01)。
　　(3)組織病理學觀察
　　治療7d，HE染色顯示A組創(chuàng)面肉芽組織新生毛細血管和成纖維細胞最少，伴有壞死組織;

6、B組新生毛細血管和成纖維細胞較A組多;C組新生毛細血管豐富，周圍有較多成纖維細胞密集分布。
　　治療7d，Masson染色顯示A組新生膠原在3組中最少，膠原稀疏且排列紊亂;B組新生膠原相對較多，排列較松散，分布相對均勻;C組創(chuàng)面新生膠原最豐富，排列致密，呈絮狀規(guī)律有序分布。
　　(4)創(chuàng)周皮膚局部氧分壓
　　治療7d，C組創(chuàng)周皮膚局部氧分壓(40.7±4.1)mmHg高于A組（35.0±3.1）mmHg和B組（35.4

7、±2.7）mmHg(P值均小于0.01)，且3組較治療前均升高（t=10.38～22.52，P值均小于0.01）。
　　(5)創(chuàng)面肉芽組織的VEGF表達
　　治療7d，3組創(chuàng)面VEGF表達分別為（3.9±0.8）×10-3、（4.8±0.9）×10-3、（5.7±0.9）×10-3，組間總體比較差異有統(tǒng)計學意義(F=11.85，P＜0.01);C組高于A、B組（分別為P＜0.01和P＜0.05)，B組高于A組(P＜0.05)

8、。
　　(6)創(chuàng)面肉芽組織TNF-α含量
　　治療7d，TNF-α濃度降低，與治療前比較均有差異（P值均小于0.01）。治療7d，C組的創(chuàng)面肉芽組織TNF-α含量低于A組和B組（P值均小于0.01），B組與A組比較有差異（P＜0.01）
　　(7)創(chuàng)面肉芽組織的巨噬細胞計數
　　治療7d，A、B、C組患者創(chuàng)面肉芽組織Ⅰ型巨噬細胞計數分別為每400倍視野下（14.8±2.3）、（11.5±3.0）、（10.7±2.

9、3）個，3組間總體比較差異明顯(F=25.14，P＜0.01);其中C組明顯低于A、B組(P＜0.05或P＜0.01);且3組均較治療前明顯降低（t=14.76～23.73，P值均小于0.01）。
　　治療7d，A、B、C組患者創(chuàng)面肉芽組織Ⅱ型巨噬細胞計數分別為每400倍視野下（32.7±3.2）、（35.1±3.3）、(41.3±3.2)個，3組間總體比較差異明顯(F=81.10，P＜0.01);其中C組明顯高于A、B組（P值均

10、小于0.01）;且3組均較治療前明顯升高（t=-69.34～-47.95，P值均小于0.01）。
　　結論：
　　創(chuàng)面局部采用VSD、沖洗和氧治療三種技術均在一定程度上有利于清潔創(chuàng)面、減輕感染、降低炎癥反應，促進創(chuàng)面肉芽組織生長。將VSD聯合含氧液沖洗應用于下肢慢性靜脈性潰瘍創(chuàng)面，可更有效地清除壞死組織，提高創(chuàng)面局部氧分壓，促進創(chuàng)面組織中的巨噬細胞分型從以Ⅰ型為主向以Ⅱ型為主的轉變，有利于毛細血管和成纖維細胞的增生以及膠原的

11、合成，促進肉芽組織的生長，從而改善創(chuàng)基受皮條件。
　　第二部分負壓封閉引流聯合含氧液沖洗對兔創(chuàng)傷后慢性感染性創(chuàng)面的影響
　　目的：
　　了解負壓封閉引流(VSD)聯合含氧液沖洗對兔創(chuàng)傷后慢性感染性創(chuàng)面肉芽組織生長及感染情況的影響，進一步探討該技術促進創(chuàng)面愈合的機制。
　　方法：
　　18只普通級健康新西蘭兔，每只背部制作2個直徑5cm圓形全層皮膚缺損創(chuàng)面并用膠圈固定創(chuàng)面周圍，經種植金黃色葡萄球菌。換藥4周后

12、，制成創(chuàng)傷后慢性感染性創(chuàng)面模型。按隨機數字表法分為單純VSD組（A組）6只，VSD+生理鹽水組（B組）6只，VSD+含氧液組（C組）6只。創(chuàng)面給予大體觀察，然后清創(chuàng)，術中留取創(chuàng)面中心肉芽組織標本，術后A組僅行VSD治療（壓力=-30～-25 kPa，下同）;B組采用VSD聯合生理鹽水沖洗治療;C組采用VSD聯合含氧液沖洗（氧流量1 L/min）治療。治療7d，拆除VSD，留取創(chuàng)面中心肉芽組織標本。取治療7d創(chuàng)面肉芽組織行HE染色、Mas

13、son染色組織病理學觀察。清創(chuàng)后VSD治療前及治療7d，用經皮氧分壓測定儀檢測創(chuàng)周皮膚局部氧分壓，創(chuàng)面組織行細菌培養(yǎng)定量，酶聯免疫吸附實驗法檢測腫瘤壞死因子α(TNF-α)表達。對數據行單因素方差分析、LSD檢驗、配對t檢驗、協(xié)方差分析。
　　結果：
　　(1)創(chuàng)面大體情況
　　大體觀察顯示清創(chuàng)前3組創(chuàng)面均有大量壞死組織及膿性分泌物，無肉芽組織生長或水腫肉芽生長。治療7d，3組創(chuàng)面均縮小，均出現新生肉芽組織，且C組創(chuàng)面

14、縮小明顯，創(chuàng)面新生肉芽組織最多，B組新生肉芽組織多于A組。
　　(2)組織病理學觀察
　　治療7d，HE染色顯示A組創(chuàng)面肉芽組織內新生毛細血管少，成纖維細胞較稀少，少許壞死組織存留;B組有較多新生毛細血管，且成纖維細胞較多;C組在3組里有最多的新生毛細血管，周圍有較多成纖維細胞環(huán)繞。
　　治療7d，Masson染色顯示A組新生膠原最少，排列松散稀疏;B組新生膠原較A組多，可見絮狀排列，但仍較紊亂;C組創(chuàng)面新生膠原在3組

15、中最多，排列致密，分布均勻，呈規(guī)律有序分布。
　　(3)創(chuàng)周皮膚局部氧分壓
　　治療前3組創(chuàng)周皮膚局部氧分壓無明顯差異（P=0.84）。治療7d，3組創(chuàng)周皮膚局部氧分壓升高。 C組創(chuàng)周皮膚局部氧分壓高于B組和A組(P值均＜0.01)，A組與B組無明顯差異（P=0.22）。
　　(4)創(chuàng)面組織細菌定量
　　治療前3組創(chuàng)面組織細菌定量無明顯差異（P=0.49）。治療7d后，創(chuàng)面組織細菌定量對數值與治療前比較均降低，C

16、組創(chuàng)面組織細菌定量對數值低于A組與B組（P值均＜0.05），且B組低于A組(P＜0.01)。
　　(5)創(chuàng)面肉芽組織TNF-α含量
　　治療前，3組創(chuàng)面組織TNF-α含量無明顯差異（P=0.59）。治療7d，3組織TNF-α表達降低，C組低于A組和B組(P＜0.01)，且B組低于A組(P＜0.01)。
　　結論：
　　應用VSD聯合含氧液沖洗技術治療兔創(chuàng)傷后慢性感染性創(chuàng)面，可顯著提高創(chuàng)面局部氧分壓，避免特殊條件下