中緬邊境地區(qū)蚊蟲(chóng)種群調(diào)查、分子鑒定及球形芽孢桿菌殺蟲(chóng)效果檢測(cè).pdf

1、目的：蚊傳播疾病是通過(guò)蚊蟲(chóng)叮咬傳播的一類傳染病，嚴(yán)重威脅著人類的健康。中緬邊境地區(qū)由于其特殊的氣候、地理環(huán)境、邊境人員往來(lái)密切等因素影響，導(dǎo)致蚊蟲(chóng)種類繁多、種群組成復(fù)雜，使瘧疾等蚊傳播疾病常年發(fā)生，該地區(qū)也成為我國(guó)輸入性瘧疾的重要通道。圍繞中緬邊境地區(qū)蚊蟲(chóng)種群開(kāi)展相關(guān)工作，獲取部分信息和數(shù)據(jù)，將為該地區(qū)蟲(chóng)媒病防治提供依據(jù)。
　　本課題組首先對(duì)中緬邊境緬甸克欽地區(qū)部分村莊的蚊媒種群進(jìn)行調(diào)查，了解當(dāng)?shù)氐奈妙惙N群組成和密度;繼而，利用分

2、子生物學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)，對(duì)捕獲于緬甸克欽地區(qū)部分按蚊進(jìn)行了蚊種鑒定;最后，利用Probit analysis的生物測(cè)定方法，完成了球形芽孢桿菌對(duì)中華按蚊的殺蟲(chóng)效果測(cè)定。
　　方法:
　　1.采用誘蚊燈法捕獲蚊蟲(chóng)，于黃昏分別置燈于人房，次日清晨收燈，將每日收集到的蚊蟲(chóng)冷凍麻醉后進(jìn)行形態(tài)學(xué)分類鑒定及保存處理。體式顯微鏡下觀察所采集按蚊的形態(tài)學(xué)特征，對(duì)按蚊種類進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。
　　2.提取單只按蚊基因組DNA、PCR擴(kuò)增I

3、TS2區(qū)段、PCR產(chǎn)物電泳分析、PCR產(chǎn)物測(cè)序、ITS2序列分析并構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，對(duì)蚊種進(jìn)行核酸分子鑒定。
　　3.在中緬邊境地區(qū)捕獲飽血的中華按蚊，帶回實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)產(chǎn)卵、孵化，應(yīng)用不同濃度球型芽孢桿菌(Bacillus sphaericus，Bs)對(duì)中華按蚊3齡幼蟲(chóng)齡殺傷效果進(jìn)行Probitanalysis生物測(cè)定。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)置Bs濃度從低到高的不同實(shí)驗(yàn)組，并設(shè)置空白對(duì)照組。每組取500ml去氯自來(lái)水于搪瓷碗中，每碗加入一定數(shù)

4、量3齡中華按蚊幼蟲(chóng)，再分別按照不同藥物濃度加入相應(yīng)量的Bs2362，輕輕攪勻。分別在加藥后12h、24h、36h、48h、60h和72h計(jì)數(shù)幼蟲(chóng)死亡數(shù)量。
　　結(jié)果:
　　1.在中緬邊境緬甸克欽地區(qū)JHK、L1、JYH、MSY四個(gè)村莊共捕獲按蚊1536只，庫(kù)蚊6260只，伊蚊45只，其它蚊種215只，總和8056只;從蚊蟲(chóng)種群組成可以看出，庫(kù)蚊為主要蚊種，其次為按蚊;對(duì)捕獲的所有按蚊進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，共鑒定出了13種不同按蚊，

5、分別符合微小按蚊、多斑按蚊、可赫按蚊、美彩按蚊、中華按蚊、須喙按蚊、迷糊按蚊、棋斑按蚊、帶足按蚊、克勞按蚊、五斑按蚊、庫(kù)態(tài)按蚊、雷氏按蚊的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。其中，微小按蚊居多，其它依次為庫(kù)態(tài)按蚊、中華按蚊、迷糊按蚊、帶足按蚊、多斑按蚊等，不同調(diào)查村莊按蚊分布有所不同。
　　2.對(duì)上述按蚊中的10種按蚊進(jìn)行單只雌蚊DNA提取、ITS2區(qū)段PCR擴(kuò)增、測(cè)序、序列比對(duì)，進(jìn)一步確定蚊種，其中微小按蚊、多斑按蚊、可赫按蚊、美彩按蚊、中華按蚊、迷糊

6、按蚊、帶足按蚊、庫(kù)態(tài)按蚊等8種按蚊均與形態(tài)學(xué)鑒定一致，而須喙按蚊和雷氏按蚊等2種按蚊蚊種均與形態(tài)學(xué)鑒定不一致。
　　3.隨著B(niǎo)s2362濃度的增加，中華按蚊3齡幼蟲(chóng)的累積死亡率逐漸增加;Bs五個(gè)梯度濃度的log值和死亡率的概率值具有很好的線性關(guān)系;24h、36h、48h、60h的LC50值分別為16.01IU/L、4.11IU/L、1.56IU/L、0.44IU/L，計(jì)算24h、36h、48h、60h的LC95值分別為1133.7

7、0IU/L、263.55IU/L、101.95 IU/L、95.17IU/L。
　　結(jié)論:
　　1.明確了中緬邊境地區(qū)的蚊蟲(chóng)種群組成和密度，民房附近以庫(kù)蚊居多，其次是按蚊。不同調(diào)查點(diǎn)因自然環(huán)境各異，蚊屬組成有較大差異;山村環(huán)境的按蚊比例明顯高于城鎮(zhèn)環(huán)境。按蚊蚊種鑒定的結(jié)果提示，該區(qū)域按蚊種類繁多，以微小按蚊為最優(yōu)勢(shì)按蚊蚊種。
　　2.分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)技術(shù)為準(zhǔn)確鑒定蚊種的一種有效方法，同時(shí)可作為傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定的