安定單克隆抗體的研制（一）——安定抗原性BSA結(jié)合物合成、多克隆抗體制備和初步法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究.pdf

1、目的:(1)比較兩種合成安定衍生物的方法,建立一種新的安定抗原性BSA(Bovine Serum Albumin)結(jié)合物的合成途徑,為同類型小分子抗原的抗原性BSA結(jié)合物合成提供新的技術(shù)路線;(2)制備抗安定的多克隆抗體,采用ELISA法檢測(cè)所合成安定抗原性BSA結(jié)合物的免疫原性和反應(yīng)原性,為制備單克隆抗體提供可靠的篩選方法;(3)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)安定中毒大鼠腦組織中安定,為安定或其它小分子物質(zhì)的檢測(cè)提供新的方法.方法(1)安定抗原性

2、BSA結(jié)合物的制備利用有機(jī)合成方法分別采用戊二酸酐和1,3-二氯丙烷在安定的3位碳原子上連接可以與蛋白質(zhì)相結(jié)合的5-羰基戊酸基或1-氯丙烷基,合成安定衍生物.薄層層析和柱層析分離合成產(chǎn)物,薄層色譜掃描法、傅立葉紅外分光光度分析和超導(dǎo)核磁共振分析鑒定衍生物結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性:根據(jù)胺的制備原理將安定鹵代烴衍生物與載2體蛋白BSA上天冬酰胺(Asparagine N)、谷氨酰胺(Glutamine Q)、精氨酸(Arginine R)和賴氨酸(Ly

3、sine K)的游離氨基發(fā)生親核取代反應(yīng),制備出安定抗原性BSA結(jié)合物.紫外分光光度法和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法比較安定抗原性BSA結(jié)合物和BSA的紫外吸收峰和分子量.(2)安定多克隆抗體的制備背部皮內(nèi)多點(diǎn)注射安定抗原性BSA結(jié)合物和Furend's完全佐劑混合物初次免疫新西蘭大白兔,第21、28、35、42、49、56天安定抗原性BSA結(jié)合物和Furend's不完全佐劑混合物同樣方式加強(qiáng)免疫,第60天采血,收集血清.BSA吸收

4、后,采用ELISA法比較空白組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組和陽性對(duì)照組血清的OD值,鑒定抗體的特異性;對(duì)半稀釋法測(cè)定抗血清效價(jià).(3)腦組織中安定的免疫組織化學(xué)測(cè)定安定片粉末灌胃,復(fù)制Wistar大鼠安定中毒模型,取大腦福爾馬林固定,石蠟包埋,切片.以BSA吸收的多克隆抗血清為一抗進(jìn)行SABC免疫組織化學(xué)染色,分析.結(jié)論采用鹵代烴作為橋連劑,合成安定的鹵代烴衍生物,進(jìn)一步交聯(lián)于載體蛋白的技術(shù)路線適用于安定完全抗原的合成;該實(shí)驗(yàn)合成的安定完全抗原