核桃葉殺蟲(chóng)活性及生化機(jī)制的研究.pdf

1、核桃葉為植物胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)的樹(shù)葉，其資源豐富并存在一定的殺蟲(chóng)活性。本文研究了核桃葉對(duì)三種農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)小菜蛾(Plutella xylostella L.)、棉蚜(Aphis gossypii G.)和菜青蟲(chóng)(Pieris rapae L.)的殺蟲(chóng)活性。以參與免疫防御的關(guān)鍵酶-酚氧化酶為靶點(diǎn)進(jìn)行研究，闡明核桃葉殺蟲(chóng)的作用機(jī)制，為核桃葉靶向殺蟲(chóng)提供理論依據(jù)。
　　(1)測(cè)定核桃葉50％、70

2、％、90％乙醇提取物對(duì)小菜蛾、棉蚜和菜青蟲(chóng)的殺蟲(chóng)活性。實(shí)驗(yàn)表明:70％乙醇提取物的胃毒活性最強(qiáng)，棉蚜＞小菜蛾＞菜青蟲(chóng)，其中棉蚜施藥30h和48h的致死中濃度分別為11.70mg/mL和5.07mg/mL;小菜蛾施藥3d和4d的致死中濃度分別為16.92mg/mL，8.31mg/mL;菜青蟲(chóng)施藥3d和4d的致死中濃度分別為21.55mg/mL和13.86mg/mL。70％乙醇提取物對(duì)棉蚜的觸殺活性最好，25mg/mL接觸48h殺蟲(chóng)率達(dá)到8

3、0.15％;90％乙醇提取物對(duì)小菜蛾和菜青蟲(chóng)的觸殺活性最好，同樣條件下殺蟲(chóng)率達(dá)71.23％和56.12％。70％乙醇提取物對(duì)小菜蛾的生長(zhǎng)抑制效果最好，24h體重抑制率達(dá)34.12％;90％乙醇提取物對(duì)菜青蟲(chóng)的生長(zhǎng)抑制效果最好，24h體重抑制率為41.23％。90％乙醇提取物對(duì)三種試蟲(chóng)拒食活性最強(qiáng)，48h的非選擇性和選擇性拒食活性均為棉蚜(81.96％，87.74％)＞菜青蟲(chóng)(75.75％，79.35％)＞小菜蛾(61.20％，65.23

4、％)。
　　(2)以小菜蛾為昆蟲(chóng)模型，探究核桃葉70％乙醇提取物殺蟲(chóng)的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)表明:核桃葉提取物在給藥初期可以激活小菜蛾體外血淋巴的黑化，3d后黑化又被抑制。中間產(chǎn)物多巴的含量隨著給藥濃度的增加而升高，驗(yàn)證了核桃葉對(duì)黑化反應(yīng)的激活作用。在蛋白質(zhì)水平上，核桃葉70％乙醇提取物對(duì)血淋巴中蛋白含量產(chǎn)生影響，以給藥48h為分界點(diǎn)，蛋白質(zhì)含量增后降低，變化浮動(dòng)在10％左右。在血糖水平上，血淋巴中海藻糖的含量隨著提取物濃度的增加而降低，

5、隨著時(shí)間的變化在昆蟲(chóng)體內(nèi)的含量先增加后減少。
　　(3)探究殺蟲(chóng)過(guò)程中靶點(diǎn)-酚氧化酶的活性及蛋白和基因的表達(dá)量差異。酶學(xué)特性實(shí)驗(yàn)表明:小菜蛾酚氧化酶在pH=6-6.8范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好，最適pH值為6.4，在20-40℃酶活相對(duì)穩(wěn)定，最適溫度為34℃。70％乙醇提取物在體外對(duì)小菜蛾酚氧化酶有激活作用，給藥濃度9mg/mL時(shí)，激活率達(dá)到35.09％。在體內(nèi)對(duì)4齡蟲(chóng)的激活作用最強(qiáng)，測(cè)定對(duì)四齡蟲(chóng)不同組織的激活作用，血淋巴＞表皮＞頭部。通過(guò)