抗菌肽cgMolluscidin和PaDef的重組表達、純化及活性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、抗菌肽(Antimicrioal peptide)可以通過直接的殺死微生物或者免疫調(diào)控來抵抗外界的侵害。而且，可以對多種細菌、真菌起作用而沒有產(chǎn)生抗藥性的風險，具備替代抗生素的潛力。目前天然抗菌肽的產(chǎn)量非常低，顯然無法滿足大規(guī)模生產(chǎn)的需要。因此，目前迫切的需要找到一種能夠高產(chǎn)有活性抗菌肽的方法。
　　本試驗采用基因工程的方法來表達外源的抗菌肽，分別采用了兩種常見的表達系統(tǒng)，用以大腸桿菌為代表的原核表達系統(tǒng)，來表達一種新型的來源于太

2、平洋牡蠣的大小為55 AA的抗菌肽cgMolluscidin，分別構建了兩套重組表達載體pET28a-cgMolluscidin和pGEX-cgMolluscidin，經(jīng)過IPTG誘導后目的基因成功表達于上清中，再利用載體上的標簽親和純化后，測得融合蛋白產(chǎn)量分別為為8.5g/L和12.1g/L。將融合蛋白用腸激酶切后得到了無氨基酸殘留的目的蛋白cgMolluscidin，用來做抑菌試驗，但是沒有表現(xiàn)出明顯的抑菌活性。
　　采用以畢

3、赤酵母為代表的真核表達系統(tǒng)表達一種來源于鱷梨果實大小為45 AA的抗菌肽PaDef，將抗菌肽基因克隆到pPICZαA載體上，成功構建了分泌型酵母表達載體pPICZαA-PaDef。甲醇誘導后目的基因表達于酵母發(fā)酵液上清中，經(jīng)過Ni親和純化后測其產(chǎn)量為158mg/L。用孔穴擴散法和最小抑菌濃度MIC法檢驗抑菌活性時，觀測到使用畢赤酵母表達系統(tǒng)表達出來的抗菌肽PaDef表現(xiàn)出對革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌ATCC25923、枯草芽孢桿菌151

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