β腎上腺素能受體在輸尿管ICC細胞上的表達及其功能研究.pdf

1、背景及目的：
　　 Cajal間質細胞(interstitiAlcells of cajal,ICC)是首先在消化道中被發(fā)現(xiàn)，分布在自主神經(jīng)末梢和平滑肌細胞之間一種特殊間質細胞。研究表明，ICC細胞可以起搏胃腸道基本電節(jié)律(basic electricAlrhythm, BER)，其突起形成的網(wǎng)絡能夠傳播BER；ICC細胞還可作為壁內(nèi)神經(jīng)信息向平滑肌傳送的中轉站，并對有關信號起整合作用，尤其在調節(jié)NO依賴性的神經(jīng)遞質方面起重要作

2、用。隨著對ICC細胞研究的深入，Smet等在豚鼠和人的膀胱上發(fā)現(xiàn)了ICC細胞，接著又在人和動物的輸尿管、腎盂等多個部位也發(fā)現(xiàn)了ICC細胞。同時，Ross等通過免疫組化發(fā)現(xiàn)泌尿系ICC細胞與神經(jīng)聯(lián)系緊密，并可能參與神經(jīng)元對平滑肌的調控。
　　 自主神經(jīng)系統(tǒng)在輸尿管的收縮和舒張運動中起到了重要的作用，交感神經(jīng)可以通過α受體和β受體來分別引起輸尿管的收縮和舒張，膽堿能神經(jīng)通過作用于毒蕈堿受體來調控輸尿管的收縮。交感神經(jīng)分泌的腎上腺素能

3、神經(jīng)遞質能夠作用于β腎上腺素能受體，從而引起輸尿管的舒張。Β受體可以分成β1、β2和β3 三個亞型，在很多哺乳動物的輸尿管上，存在β腎上腺素能受體亞型的分布，比如狗的輸尿管表達β3、大鼠的輸尿管表達β1、兔子的輸尿管表達β2、豚鼠只表達β3，而人可以表達β1、β2和β3，腎上腺素能神經(jīng)遞質作用于相關β受體亞型后，可以降低輸尿管的收縮力和改變輸尿管的收縮形式，在輸尿管的舒張運動中起到重要作用。
　　 在胃腸道中，ICC細胞可以表達

4、多種神經(jīng)受體，如嘌呤能受體、膽堿能、緩激肽受體和前列腺素受體。我們前期研究表明，輸尿管ICC細胞膜上表達膽堿能受體并且參與了膽堿能神經(jīng)對輸尿管收縮的調控。那么，輸尿管ICC細胞是否表達β腎上腺素能受體并參與腎上腺素能神經(jīng)對輸尿管運動的調控？目前國內(nèi)外還未見相關報道。
　　 本研究通過免疫熒光染色的方法直接觀察ICC細胞上β腎上腺素受體亞型的表達情況；以及通過測定豚鼠輸尿管肌條興奮性和收縮性的方法，觀察Glivec 特異性阻斷IC

5、C細胞后，對β腎上腺素能受體激動劑舒張輸尿管肌條功能的影響，來研究輸尿管ICC細胞在輸尿管收縮和舒張功能調節(jié)中的作用。從而，初步探討輸尿管ICC細胞在腎上素能神經(jīng)遞質傳遞中的作用，結果有助于進一步闡明輸尿管神經(jīng)調控機制，為輸尿管收縮和舒張功能異常的研究提供新的切入點。
　　 方法：
　　 本課題以成年豚鼠為研究對象。（1）形態(tài)學觀察：采用免疫熒光染色法，在激光共聚焦顯微鏡下觀察輸尿管ICC細胞上β腎上腺素受體亞型（β1、

6、β2和β3）的表達；
　　 （2）功能學研究：在體外，運用肌條實驗方法，對比實驗組（阻斷了ICC細胞的肌條）和對照組（正常豚鼠肌條）在β受體激動劑作用下興奮性及收縮性的變化，來研究ICC細胞上β腎上腺素受體的功能以及ICC細胞對β腎上腺素受體的功能的影響。
　　 結果：
　　 1.激光共聚焦顯微鏡下觀察顯示，豚鼠輸尿管內(nèi)可見c-kit 染色陽性的輸尿管ICC細胞。
　　 2.輸尿管ICC細胞表達β3 受體

7、，未見β1、β2 受體表達。
　　 3.在一定前負荷下(2.0g)，輸尿管肌條出現(xiàn)自發(fā)性收縮，CGP12177(選擇性β3 受體激動劑)可引起自發(fā)性收縮振幅顯著降低，自發(fā)性收縮頻率減慢；表明β3 受體激動劑能夠對豚鼠輸尿管產(chǎn)生舒張效應。
　　 4.Glivec 阻斷輸尿管ICC細胞后，CGP12177對輸尿管肌條的自發(fā)性收縮的舒張效應減弱；表明ICC細胞能夠影響輸尿管β3 受體的舒張功能。
　　 5. 異丙腎上腺

8、素能夠引起肌條的舒張；Glivec 阻斷輸尿管ICC細胞后，異丙腎上腺素對輸尿管肌條的自發(fā)性收縮的舒張效應亦減弱。可見，ICC細胞參與了異丙腎上腺素對輸尿管的舒張作用，即表明ICC細胞可能參與腎上腺素能神經(jīng)遞質對輸尿管的舒張作用，并可能介導腎上腺素能神經(jīng)遞質的傳遞。
　　 結論：
　　 1．豚鼠輸尿管ICC細胞上表達腎上腺素能β3 受體。
　　 2．激動ICC細胞上β3 受體能夠引起輸尿管舒張。
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