HDACi對苯致再障小鼠TOPOⅡα表達水平變化的機制探討.pdf

1、目的:
　　苯作為一種常用工業(yè)原料，可經多途徑進入人體，而骨髓細胞則為苯誘導產生毒性的靶器官之一。體外研究顯示苯及其代謝產物可通過影響TOPOⅡα啟動子相關基因的甲基化和組蛋白的乙?；揎?，影響基因的正常轉錄、復制和蛋白翻譯。同時，苯中毒動物模型研究顯示在體內苯及其代謝物可引起骨髓細胞的凋亡，致外周血三系下降，對DNA造成損傷。苦瓜蛋白(MCP30)作為一種組蛋白去乙?；敢种苿?，能抑制組蛋白去乙?；傅幕钚?，提高組蛋白乙?；潭?/p>

2、。本課題組旨在研究苯及其代謝物對小鼠骨髓單個核細胞TOPOⅡα表達的調控機制，即TOPOⅡα啟動子組蛋白乙酰化水平改變，以及組蛋白去乙酰化酶抑制劑苦瓜蛋白(MCP30)對其的逆轉作用。
　　方法:
　　1、動物模型的建立:
　　(1)將140只6-7周齡雄性CD1小鼠按體重隨機分配為6組間斷長期苯蒸氣吸入以及藥物注射，分別為A組(0ppm+NS)、B組(300ppm+NS)、C組(0ppm+TSA)、D組(300ppm

3、+TSA)、E組(0ppm+MCP30)、F組(300ppm+MCP30)。A、B兩組各30只，其余四組各20只。藥物干預:吸苯日吸苯前予腹腔注射藥物TSA、MCP30，劑量均為為1mg/kg。
　　(2)各組小鼠分別于造模前及造模結束兩天后進行外周血三系計數。小鼠頸椎脫臼處死后，分離雙側股骨及脛骨，留取股骨做病理進行形態(tài)學觀察。
　　2、取各組小鼠骨髓單個核細胞:
　　(1)RT-PCR測定各組小鼠TOPOⅡα啟動子

4、各調控因子(SP1、ATF-2、SP3、C-MYB、IBCP90) mRNA表達水平的改變。
　　(2)染色質免疫沉淀分析法(ChIP)檢測TOPOⅡα含量變化與TOPOⅡα啟動子組蛋白H3、H4乙?；礁淖兊年P系。
　　結果:
　　1、B組小鼠吸苯后較吸苯前外周血三系計數明顯下降，分別下降37.9％、11.3％，27.5％(P＜0.05)。B組較A組外周血三系亦明顯下降，分別下降42.2％、12.2％、29.6％(

5、P＜0.05)。骨髓病理形態(tài)學檢查顯示造血細胞減少，非造血細胞如脂肪細胞和淋巴細胞等增加。D組較B組外周血三系計數有所上升，分別上升43.7％、6.2％、22.2％(P＜0.05)。F組較B組外周血三系計數有所上升，分別上升42.1％、6.1％、19.4％(P＜0.05)。D組、F組骨髓病理形態(tài)學檢查顯示造血細胞較B組增多。
　　2、拓撲異構酶Ⅱα啟動子調控因子mRNA水平各組的變化:
　　(1)SP1、C-MYB mRNA

6、表達水平:B組較A組明顯降低，D組和F組較B組升高，均具有統計學意義(P＜0.01)。
　　(2)ATF-2、ICBP90 mRNA表達水平:B組較A組、D組和F組較B組不變，無統計學意義。
　　(3)SP3 mRNA表達水平:B組較A組明顯升高，具有統計學意義(P＜0.01)。D組和F組較B組降低，具有統計學意義(P＜0.05)。
　　3、與乙?；M蛋白H3、H4結合的拓撲異構酶Ⅱα啟動子水平變化:
　　(1)

7、與乙?；M蛋白H3結合的拓撲異構酶Ⅱα啟動子水平，B組水平較A組明顯降低，具有統計學意義(P＜0.01)。D組水平較B組明顯升高，具有統計學意義(P＜0.01);F組水平較B組明顯升高，具有統計學意義(P＜0.05)。
　　(2)與乙酰化組蛋白H4結合的拓撲異構酶Ⅱα啟動子水平，B組水平較A組明顯降低，具有統計學意義(P＜0.01)。D組、F組水平分別較B組明顯升高，具有統計學意義(P＜0.01)。
　　結論:
　　1

8、. MCP30對苯致小鼠再生障礙性貧血外周血三系、骨髓造血組織的損傷具有逆轉作用。
　　2. 拓撲異構酶Ⅱα啟動子各調控因子mRNA表達水平的改變:B組與A組相比，SPl、C-MYB mRNA表達水平降低，SP3 mRNA表達水平升高，MCP30對其均有逆轉作用，而ATF-2、ICBP90 mRNA表達水平不變。
　　3. 實驗研究則顯示TOPOⅡα含量降低與TOPOⅡα啟動子組蛋白H3、H4乙酰化水平降低有關，MCP30對