尿液膽汁酸代謝輪廓分析在妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥診斷與分度中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　1.建立一種同時(shí)檢測(cè)尿液非硫酸化和硫酸化膽汁酸代謝輪廓的超高液相色譜-三重四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Triple-TOF/MS）方法。
　　2.采用 UPLC-Triple-TOF/MS對(duì)正常妊娠組、輕度和重度妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥（Intrahepatic cholestasis of pregnancy, ICP）患者尿液膽汁酸代謝輪廓進(jìn)行分析，并運(yùn)用經(jīng)典判別分析以期獲得最優(yōu)的 ICP診斷模式，尋找潛在的生物

2、標(biāo)志物，為臨床 ICP的診斷、鑒別診斷及分度提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.色譜條件：色譜柱Kinetex XB-C18(50×2.1 mm,1.7μm)，柱溫：30℃，流速：0.2 ml/min。流動(dòng)相A：15 mmol/L醋酸銨，B:乙腈，梯度洗脫。質(zhì)譜條件：電離子噴霧源（ESI），采用負(fù)離子模式掃描，以各膽汁酸母離子質(zhì)量數(shù)±0.05 Da為目標(biāo)離子進(jìn)行子離子掃描，并以母離子作為定量離子。內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，進(jìn)樣量5μl

3、，檢測(cè)時(shí)間20 min。
　　2.用Bond Elut C18固相萃取小柱進(jìn)行尿液樣品預(yù)處理。
　　3.采用Peakview數(shù)據(jù)處理軟件利用MS和MS/MS的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)、特征碎片離子及同位素等信息，并與已知的膽汁酸比對(duì)，初步確定膽汁酸的種類(lèi)。
　　4.采用UPLC-Triple-TOF/MS法對(duì)26例正常孕婦，14例輕度ICP患者，14例重度ICP患者進(jìn)行尿液膽汁酸代謝輪廓分析，并運(yùn)用經(jīng)典判別分析方法獲得最優(yōu)的ICP

4、診斷與分度模式，篩選出ICP靈敏、特異的生物標(biāo)志物。
　　結(jié)果：
　　1.有標(biāo)準(zhǔn)品的28種非硫酸化和1種硫酸化膽汁酸基本實(shí)現(xiàn)基線分離，通過(guò)鑒定初步認(rèn)識(shí)到尿液中40種可能硫酸化膽汁酸和17種與已知非硫酸化膽汁酸存在同分異構(gòu)的代謝物。
　　2.尿液膽汁酸的線性范圍為：0.020-20μmol/L，r為0.9925-1.0000，具有良好的相關(guān)性，最低檢測(cè)限0.001μmol/L。該方法的日內(nèi)變異系數(shù)均小于17.8％，日間變

5、異系數(shù)均不超過(guò)25.9%，各物質(zhì)在不同濃度下均獲得相對(duì)滿(mǎn)意的回收率。
　　3.與正常妊娠組相比，輕度和重度ICP組患者尿液非硫酸化與硫酸化膽汁酸均有不同程度的增高，而硫酸化膽汁酸的增加更為顯著；尿液結(jié)合型膽汁酸中，?；墙Y(jié)合型膽汁酸較甘氨結(jié)合型膽汁酸增加更為顯著。
　　4.對(duì)于有標(biāo)準(zhǔn)品的膽汁酸，與正常妊娠組相比，輕度 ICP組GDCA、ω-TMCA和TCA顯著增高，GCDCA和GCA極顯著增高，重度ICP組α-TMCA、THC

6、A、GHCA、GCA和TLCA-S顯著增高，TUDCA和ω-TMCA極顯著增高；與輕度ICP組相比，重度ICP組TUDCA、ω-TMCA、THCA和TLCA-S顯著增高。
　　5.三組人群尿液中共檢測(cè)到27種可能的硫酸化膽汁酸與15種已知非硫酸化膽汁酸的同分異構(gòu)體代謝物，組間存在差異的主要有TBA-S、GBA-S、TCA-S、GCA-S、GLCA-S及TBA、GBA、TCA同分異構(gòu)代謝物。
　　6.經(jīng)典判別分析表明以本方法所

7、檢測(cè)的三組人群中有差異的40種膽汁酸為預(yù)測(cè)變量，正常妊娠組、輕度ICP組和重度ICP組的預(yù)測(cè)成功率分別為96.2%，92.9%，92.9%，判別函數(shù)對(duì)初始分組案例94.4%進(jìn)行了正確分類(lèi)。
　　7.聯(lián)合VIP值、p(corr)值和組間存在差異的膽汁酸指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)分析篩選出TBA3、TBA-S2、TUDCA、TCA5、TCA4和ω-TMCA對(duì)ICP的診斷和分度有重要價(jià)值，可能是臨床ICP診斷和分度潛在的生物標(biāo)志物。
　　結(jié)論：