光譜法研究頭孢西丁鈉、鹽酸吡格列酮等藥物與蛋白質(zhì)的反應機理.pdf

1、蛋白質(zhì)-藥物是藥物進入人體的暫時儲存形式，控制藥物向受體釋放、防止藥物快速新陳代謝。生物體服用藥物以后，藥物進入血液進行循環(huán)，其中游離型分子轉運到組織，作用在發(fā)病部位發(fā)揮藥理作用。研究蛋白質(zhì)等生物大分子與小分子作用機制，為研究小分子的生物學效應，藥物殘留檢測過程中提取液的選擇提供理論依據(jù)，而且對促進蛋白質(zhì)組學的研究和發(fā)展也有著重要的意義。本文以牛血清白蛋白和溶菌酶為研究對象，用熒光光譜方法研究了藥物小分子與蛋白之間的相互作用，并且對研究

2、方法做了一些改進。研究內(nèi)容分為七部分。
　　第一章：概括總結了蛋白質(zhì)對人類生命活動的重要作用，藥物進入人體后生物藥效發(fā)揮的過程及蛋白質(zhì)在藥物發(fā)揮藥效的過程中所占的地位。系統(tǒng)地講述了研究蛋白質(zhì)與藥物小分子相互作用的常規(guī)方法，以此為基礎，引出本文的立題思路。引用文獻51篇。
　　第二章：利用熒光猝滅法和同步熒光法比較研究了不同溫度下頭孢西丁鈉(CFXS)與牛血清白蛋白（BSA)之間的反應機理。研究結果表明了同步熒光法所得結合常數(shù)

3、隨溫度的變化可以用來判斷BSA-CFXS體系的猝滅類型，其結果與熒光猝滅法一致，猝滅類型為靜態(tài)猝滅。并且在結合位點數(shù)，作用力類型，藥物與蛋白的協(xié)同性，結合距離等方面兩種方法結果基本相同，詮釋了同步熒光光譜法可以結合傳統(tǒng)的熒光猝滅法共同研究物質(zhì)與蛋白的反應機理。
　　第三章：通過考察蛋白熒光變化的傳統(tǒng)熒光光譜法和觀察藥物熒光變化的彈性散射熒光法，分別研究了不同溫度下頭孢西丁鈉(CFXS)與牛血清白蛋白(BSA)之間的反應機理。結果表

4、明CFXS通過靜態(tài)猝滅方式猝滅BSA的內(nèi)源熒光。兩種方法的結果基本一致。彈性散射熒光法得到的BSA-CFXS體系結合常數(shù)明顯大于傳統(tǒng)熒光光譜法所得參數(shù)，并用紫外吸收光譜法驗證了彈性散射熒光法的正確性，表明以藥物熒光變化為考察對象研究藥物與蛋白的作用機理的方法更準確、合理，并推測出藥物與蛋白之間存在一種“點對面”的作用方式。
　　第四章：利用熒光猝滅法和同步熒光法進行了鹽酸吡格列酮(PGH)與牛血清白蛋白(BSA)之間反應機理的比較

5、研究。結果表明：兩種方法在研究PGH-BSA體系的猝滅類型、結合常數(shù)、結合位置、作用力類型、協(xié)同性及能量轉移距離等方面，得到了相同的結果。表明同步熒光光譜法可以用于藥物與蛋白反應機理的研究。
　　第五章：在Tris-HCl緩沖溶液中(pH=7.40)，利用研究對象為蛋白熒光變化的傳統(tǒng)熒光光譜法和考察對象為藥物熒光變化的彈性散射熒光法，比較研究了不同溫度下（298 K、310 K和318 K）鹽酸吡格列酮(PGH)與牛血清白蛋白(B

6、SA)之間的反應機理。結果表明PGH與BSA之間猝滅方式為靜態(tài)猝滅，兩者主要通過靜電作用力結合，結合位點數(shù)約為1；Hill系數(shù)nH等于1，表明BSA與后繼配體不存在協(xié)同作用。彈性散射熒光法得到的BSA-PGH體系結合常數(shù)顯著地大于傳統(tǒng)熒光光譜法所得，詮釋了考察藥物熒光變化研究藥物與蛋白的作用機理的方法更準確、合理，并推測出藥物與蛋白之間存在一種“點對面”的作用方式。
　　第六章：本文利用熒光猝滅法和同步熒光法比較研究了298 K、

7、310 K和318 K溫度下玫瑰紅B(RHB)與牛血清白蛋白（BSA)之間的反應機理。研究結果表明了RHB通過靜電作用力與 BSA結合使其發(fā)生熒光猝滅，猝滅類型為靜態(tài)猝滅；結合位置主要位于BSA的疏水亞結構域ⅡA，結合位點數(shù)約為1，結合常數(shù)為104。nH約等于1，RHB對BSA的后繼配體無協(xié)同作用；r<7 nm，BSA與RHB間存在非輻射能量轉移。兩種研究方法結果相同，詮釋了同步熒光光譜法可以用于研究物質(zhì)與蛋白反應機理。
　　第七

8、章：利用熒光光譜法研究了pH=7.40生理條件下酒石酸泰樂菌素(TT)與溶菌酶(LYSO)的相互作用。TT能夠使LYSO內(nèi)源性熒光產(chǎn)生強烈的猝滅作用，據(jù)此測定了不同溫度下 TT與 LYSO反應的猝滅常數(shù)，表明該熒光猝滅過程為靜態(tài)猝滅。由Vant’s-Hoff方程式計算該反應的熱力學參數(shù)：焓變ΔH和熵變ΔS值分別為27.80 KJ/mol，166.28 J/mol·K。表明了TT與LYSO間的作用力是以疏水作用力為主。同步熒光光譜研究表明