生防細菌的分離、篩選及生防潛能評估.pdf

1、本研究旨在分離和篩選生防細菌菌株，明確其分類屬性，評估其生防潛力。取得了如下研究結(jié)果:
　　1.分離篩選獲得了促生細菌菌株AW-17和CanL-30。
　　分別從湖北武漢、湖北咸寧和安徽蕪湖采集的植物樣品中分離到82個菌株，包括細菌菌株和酵母菌菌株。采用擬南芥平板對峙培養(yǎng)試驗和油菜浸種促生試驗相結(jié)合的方法篩選得到2個促進植物生長的細菌菌株AW-17和CanL-30。菌株AW-17和CanL-30均能夠通過產(chǎn)生揮發(fā)性有機物促進

2、擬南芥幼苗生長，另外菌株AW-17還能夠產(chǎn)生吲哚乙酸IAA，具有溶解不可溶性磷的能力。將這兩株細菌用于盆栽油菜促生試驗，結(jié)果表明:菌株AW-17對油菜生長有穩(wěn)定促生效果，而菌株CanL-30則不具備盆栽促生能力。
　　2.明確了菌株AW-17和CanL-30的生物學(xué)特性，并對其進行了鑒定。
　　菌株AW-17單菌落乳黃色，質(zhì)地光滑粘稠，在8℃～35℃條件下均能生長，最適生長溫度范圍為20℃～30℃，在7％及以下的鹽濃度條件下

3、均能生長，但無法在10％鹽濃度條件下生長，革蘭氏染色陰性，不產(chǎn)生芽孢。生理生化測定結(jié)果和16SrDNA序列分析表明:菌株AW-17屬于液質(zhì)沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）。菌株CanL-30單菌落乳白色，質(zhì)地光滑干燥，在15℃～40℃條件下能較好的生長，最適生長溫度范圍為20℃～30℃，在7％及以下的鹽濃度條件下均能生長，但無法在10％鹽濃度條件下生長，革蘭氏染色陽性，產(chǎn)生芽孢。鑒定結(jié)果表明菌株CanL-30屬于枯

4、草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。
　　3.篩選出拮抗菌株CanL-30，并對其產(chǎn)生的抗真菌代謝產(chǎn)物進行了分離純化。
　　利用平板對峙培養(yǎng)和離體油菜葉片接種相結(jié)合的方法，篩選到1株能夠穩(wěn)定抑制灰葡萄孢的拮抗菌株CanL-30，其能夠?qū)Χ喾N病原菌產(chǎn)生拮抗作用，二分格皿試驗和帶毒平板試驗結(jié)果表明菌株CanL-30主要通過產(chǎn)生抗真菌代謝產(chǎn)物抑制病原菌的生長。菌株CanL-30在NB培養(yǎng)基中，28℃、150r/min

5、的條件下?lián)u培72h，產(chǎn)生的抗菌代謝產(chǎn)物抑菌效果最好，抑菌率達到90％，利用酸沉淀和甲醇萃取的方法對該條件下CanL-30產(chǎn)生的抗菌代謝產(chǎn)物進行提取，帶毒平板試驗結(jié)果顯示，不同濃度粗提物平板對灰霉菌均有不同程度的抑制作用，其中365μg/mL粗提物平板對灰霉菌的抑菌率高達100％。CanL-30抗真菌粗提物具有耐高溫、抗紫外的特性，其在100℃的水浴鍋中處理60min鐘后，抑菌活性與對照相比無差異。用紫外燈(UV-C，30W)處理抗菌粗提