miRNA-21在人增生性瘢痕成纖維細胞中的表達與調(diào)控研究.pdf

1、研究背景：嚴重創(chuàng)傷、燒傷及外科手術(shù)后常并發(fā)程度不等的增生性瘢痕，影響美觀，甚至導(dǎo)致嚴重的畸形和功能障礙，降低患者生活質(zhì)量。在增生性瘢痕形成過程中主要是成纖維細胞異常增殖與凋亡抑制、分泌和釋放的正向與負向細胞因子調(diào)節(jié)機制的異常以及細胞外基質(zhì)膠原合成與降解的失平衡。盡管已有很多研究證實增生性瘢痕與正常皮膚成纖維細胞之間存在差異，但導(dǎo)致增生性瘢痕形成的內(nèi)在機制仍有待進一步闡明。
　　微小 RNA21（miRNA）作為內(nèi)源性調(diào)控性 RNA

2、，廣泛參與細胞增殖、分化、凋亡等病理生理過程。我們課題組前期研究顯示人增生性瘢痕組織中miRNA表達譜較正常人皮膚有顯著改變，其中miRNA-21表達變化比較明顯，而有較多研究已證實 miRNA-21在細胞異常增殖如腫瘤和多種纖維化的發(fā)生發(fā)展和演化過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。因此我們推測 miRNA-21可能參與增生性瘢痕的形成和演化過程。
　　目的：觀察miRNA21在體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細胞中的表達與調(diào)控變化，分析其與

3、 TGF-β1、Smad7、PDCD4、ColⅠ和Ⅲ型膠原表達變化的相關(guān)性，為深入闡明增生性瘢痕形成的新機制及治療靶點提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。
　　方法：（1）采用組織塊和酶消化相結(jié)合方法，體外培養(yǎng)人增生性瘢痕和正常皮膚成纖維細胞，應(yīng)用實時熒光定量 PCR、蛋白質(zhì)印跡法及免疫細胞化學(xué)等方法檢測增生性瘢痕和正常皮膚成纖維細胞中 miRNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ及ColⅢ基因和蛋白表達。（2）通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)

4、染將 miRNA21模擬物導(dǎo)入人增生性瘢痕成纖維細胞中，采用熒光定量 RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測人增生性瘢痕成纖維細胞中 miRNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ、ColⅢ的表達變化。（3）通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染將miRNA21抑制物導(dǎo)入人增生性瘢痕成纖維細胞中，采用實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測人增生性瘢痕成纖維細胞中miRNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ、ColⅢ的表達變化。
　

5、　結(jié)果：（1）與正常皮膚相比，體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細胞miRNA21、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表達顯著升高，而PDCD4低表達，miRNA21與TGF-β1呈正相關(guān)，與PDCD4呈負相關(guān)。（2）轉(zhuǎn)染 miRNA21模擬物組人增生性瘢痕成纖維細胞 miRNA21、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ基因和蛋白表達均較對照組明顯增強，而Smad7、PDCD4基因和蛋白表達均較對照組明顯下調(diào)。（3）轉(zhuǎn)染miRNA21抑制物組人增生

6、性瘢痕成纖維細胞Smad7、PDCD4基因和蛋白表達較對照組明顯上調(diào)，而 TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ基因和蛋白表達均較對照組明顯減弱。
　　結(jié)論：（1）miRNA-21、TGF-β1、ColColⅠ、ColⅢ在體外培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細胞中的表達明顯高于正常皮膚成纖維細胞，而 PDCD4及 Smad7表達顯著低于正常皮膚成纖維細胞，可能參與增生性瘢痕的形成及演變過程；（2）miRNA21上調(diào)能促進體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖