MxA蛋白的抗體制備及其特異性分析.pdf

1、MxA蛋白是I型干擾素(INF-α/β)所誘導(dǎo)的蛋白，具有廣泛的抗病毒活性(主要針對(duì)RNA病毒)。此蛋白產(chǎn)物的誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)特征與細(xì)胞的抗病毒狀態(tài)呈完全的平行，病毒感染時(shí)內(nèi)源性干擾素明顯升高，MxA可反映內(nèi)源性干擾素的狀態(tài)，從而間接反映病毒感染，因此MxA量的升降可作為病毒感染的一個(gè)特異的指標(biāo)。在國(guó)外，該蛋白已經(jīng)引起了廣大研究者的關(guān)注，并進(jìn)行了深入的探討；在國(guó)內(nèi)，近年來(lái)也逐漸引起學(xué)者的興趣。隨著MxA蛋白的深入研究，迫切需要制備對(duì)應(yīng)抗體來(lái)開(kāi)

2、展該項(xiàng)研究工作，而且MxA作為病毒感染的特異性指標(biāo)，抗MxA單克隆抗體制劑本身也具有開(kāi)發(fā)利用的潛能，具有廣闊的應(yīng)用前景。盡管國(guó)外已有該蛋白的特異性多抗和單抗，但均未商品化，在國(guó)內(nèi)并未曾有有關(guān)報(bào)道，因此我們有必要在國(guó)內(nèi)制備對(duì)應(yīng)的高特異性的多抗和單抗供廣大研究工作者使用，并研制MxA快速檢測(cè)試劑盒搶占中國(guó)市場(chǎng)，為廣大醫(yī)患服務(wù)。 本研究在已獲得該基因并重組入克隆載體的基礎(chǔ)上，通過(guò)基因工程方法構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-32a(+)-MxA

3、，并在工程菌BL21中獲得高效表達(dá)，蛋白含量可達(dá)菌體總蛋白量的25％，以割膠純化的純度達(dá)90％以上的目的蛋白進(jìn)行腹腔注射免疫小鼠并利用不同形式的MxA蛋白作為抗原對(duì)抗血清進(jìn)行特異性分析，結(jié)果表明獲得了特異性較高的抗血清；繼而使用PEG4000利用細(xì)胞融合技術(shù)將該蛋白免疫的Balb/c小鼠的脾臟細(xì)胞與鼠骨髓瘤細(xì)胞系Sp2/0細(xì)胞融合，經(jīng)三輪單克隆后成功地獲得了分泌該蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，命名為雜交瘤細(xì)胞3C2，利用Western-b