化肝通絡方對大鼠活化的肝星狀細胞增殖的影響及其作用機制研究.pdf

1、目的:
　　進行原發(fā)性膽汁性肝硬化體外研究，探索化肝通絡方對大鼠肝星狀細胞增殖的影響及其作用機制。
　　方法:
　　1.含藥血清的制備:40只清潔級SD大鼠隨機分為化肝通絡方高劑量組(73.7g/kg/d)、中劑量組(36.8g/kg/d)、低劑量組(18.4g/kg/d)及空白組(0.9％NaCl)，持續(xù)灌胃7天，每天1次，每次2ml，最后1天灌胃之前禁食24h，最后一次灌胃1h后腹主動脈采血，靜置，離心，補體滅活，

2、過濾細菌，分裝，-80℃凍存。
　　2.藥物成分測定:質譜分析藥物組成并與標準品比對，確定其藥物成分。
　　3.化肝通絡方對大鼠活化肝星狀細胞增殖的影響:MTT法測定不同組別含藥血清作用于活化肝星狀細胞24h后，各組之間OD值的改變，確定藥物對細胞增殖的影響。
　　4.化肝通絡方影響活化肝星狀細胞增殖作用機制研究:不同組別含藥血清和空白組血清作用于相同條件活化肝星狀細胞24h，提取蛋白后western blot法檢測T

3、GF-β1、smad2/3、smad7蛋白質的表達，確定本方對TGF-β/smad通路的影響。
　　結果:
　　1.含藥血清制備:質譜分析對照品與中藥原液，確定藥液中含有化肝通絡方有效成分。
　　2.化肝通絡方對大鼠肝星狀細胞增殖的影響:中藥作用后的細胞DO值顯著下降，說明本方對肝星狀細胞的增殖起到抑制作用，但是低劑量組無統計學差異(P＞0.05)，中、高劑量組差異明顯（**P＜0.01）。
　　3.化肝通絡方影

4、響肝星狀細胞增殖作用機制研究:western blot檢測結果顯示與空白組相比含藥血清低劑量組TGF-β1、smad2/3蛋白無明顯差異（*P＞0.05），中高劑量組含量下降（*P＜0.05）;含藥血清中高劑量組smad7蛋白表達明顯上升（*P＜0.05），低劑量組差異不顯(P＞0.05)。
　　結論:
　　1.化肝通絡方藥液含有目標成分。
　　2.化肝通絡方含藥血清對活化肝星狀細胞增殖活動具有抑制作用。
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