基于抗草甘膦基因的棉花莖尖農桿菌遺傳轉化方法的研究.pdf

1、棉花是一種重要的經濟作物，在我國國民經濟發(fā)展等方面有著至關重要的作用。草害是影響棉花生產的主要因素之一，對棉花的產量及品質有較大的影響。運用基因工程創(chuàng)新棉花種質資源，培育應用轉基因抗除草劑的棉花品種對于棉田化學除草，降低植棉投入，提高植棉效率具有重要的意義。本研究以具有自主知識產權的抗草甘膦除草劑基因（EPSPS-G6為外源基因，通過優(yōu)化多種轉化條件，完善了基于抗草甘膦基因的棉花莖尖農桿菌遺傳轉化技術，并將EPSPS-G6基因導入珂字棉

2、201、YZ-1及中棉所49等棉花品種中，創(chuàng)制出抗草甘膦轉基因棉花種質系。研究結果如下:
　　 1.以中棉所49、珂字棉201及YZ-1為受體材料，通過對培養(yǎng)基草甘膦濃度的篩選、農桿菌侵染濃度、共培養(yǎng)時間以及恢復培養(yǎng)條件等因素的優(yōu)化，完善了基于抗草甘膦基因的棉花莖尖農桿菌遺傳轉化技術。研究結果表明，適合于棉花莖尖農桿菌遺傳轉化法的草甘膦篩選濃度為10 mg/L;莖尖轉化體系:以20 min為農桿菌侵染時間，農桿菌菌液OD600為

3、0.9～1.0，共培養(yǎng)時間為48 h，選用SH培養(yǎng)基并加入適量活性炭(0.5 g/L)作為恢復培養(yǎng)基。以莖尖外植體為基數，本轉化技術的轉化成功率達6.4％。從轉化時間來看，該方法從無菌苗培養(yǎng)開始計算，獲得再生試管苗的時間僅為2個月時間，4個半月即能開花，6個月即能獲得T1代種子，說明本轉化技術具有較好的實用價值。
　　 2.以本研究建立的棉花莖尖農桿菌遺傳轉化技術，將具有我校自主知識產權的抗草甘膦基因EPSPS-G6導入中棉所4

4、9、珂字棉201及YZ-1等3個陸地棉品種（系）的莖尖。共轉化360個莖尖，共獲得60株抗性再生植株，經分子檢測和草甘膦篩選后移栽成活23株。
　　 3.對再生植株(T0)的基因組DNA進行PCR擴增，26株再生植株中能擴增出與質粒DNA相同大小條帶，初步說明外源基因已成功地整合到再生植株的染色體DNA中。Southern雜交鑒定結果表明，轉基因植株的外源基因均為單拷貝。轉基因T0植株主要田間農藝性狀調查結果表明，轉EPSPS-