捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)六種酶蛋白體外對(duì)山羊外周血單個(gè)核細(xì)胞功能的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)(Haemonchus contortus)是毛圓科(Trichostrongylidae)血矛屬(Haemonchus)線(xiàn)蟲(chóng),是嚴(yán)重危害牛羊等反芻動(dòng)物的一種重要寄生蟲(chóng),蟲(chóng)體主要寄生于宿主第四胃,偶見(jiàn)于小腸,以吸食宿主血液為營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。目前,捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)病雖然在免疫學(xué)研究上有了重要的進(jìn)展,但至今仍無(wú)商品化的疫苗出現(xiàn),所以發(fā)掘新的抗原、進(jìn)一步研究蟲(chóng)體抗原的特性對(duì)于疫苗的開(kāi)發(fā)尤為重要。本文對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glu

2、tathione peroxidase,HC29)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、谷氨酸脫氫酶(glutamatedehydrogenase,GDH)、烯醇化酶(enolase,ENO)、磷酸丙糖異構(gòu)酶(triosephosphateisomerase,TPI)及醛縮酶(aldolase,ALD)進(jìn)行了重組表達(dá),進(jìn)而研究這六種重組酶蛋白體外與山羊外

3、周血單個(gè)核細(xì)胞的結(jié)合情況;對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)和增殖的影響以及對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能和分泌NO的影響。
  1捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)六種酶蛋白的表達(dá)及體外與山羊外周血單個(gè)核細(xì)胞的結(jié)合試驗(yàn)
  根據(jù)實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的質(zhì)粒表達(dá)并純化六種重組酶蛋白。無(wú)菌采集山羊頸靜脈的抗凝血,分離外周血單個(gè)核細(xì)胞,將重組蛋白以5μg/mL的濃度加入細(xì)胞中,放置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2小時(shí)后收集細(xì)胞,應(yīng)用免疫熒光抗體技術(shù)檢測(cè)到重組蛋白谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和甘油醛-3-磷

4、酸脫氫酶能夠在體外與山羊外周血單個(gè)核細(xì)胞結(jié)合,其余蛋白未檢測(cè)出這一特點(diǎn)。
  2捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)六種酶蛋白對(duì)山羊外周血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響
  根據(jù)GenBank中山羊IL-2、IL-4、IL-I0、IL-17、IFN-γ和TGF-β的序列設(shè)計(jì)符合熒光定量試驗(yàn)的引物。以β-Actin為內(nèi)參,用HC29、GAPDH、ENO、ALD、TPI和GDH重組蛋白按濃度梯度分別刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞后得到的cDNA為模板進(jìn)行熒光定量試

5、驗(yàn),檢測(cè)不同重組蛋白不同濃度刺激后細(xì)胞因子的變化情況。結(jié)果顯示,在重組蛋白HC29組中,IL-10和IFN-γ的表達(dá)量在三個(gè)濃度梯度(10μg/mL、20μg/mL和40μg/mL)下均顯著高于對(duì)照組(P<0.01);GAPDH組中,IL-2、IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ在高濃度40μ g/mL下均顯著高于對(duì)照組(P<0.01);其余四種重組蛋白組中各個(gè)細(xì)胞因子的變化不明顯(P>0.05)。
  3捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)六種

6、酶蛋白對(duì)山羊外周血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞增殖的影響
  為了檢測(cè)這六種重組蛋白對(duì)山羊外周血單個(gè)核細(xì)胞的增殖作用,將重組蛋白分別與細(xì)胞共培養(yǎng),用CCK-8法檢測(cè)增殖效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)HC29在三個(gè)濃度梯度下與對(duì)照組比較具有極顯著的增殖效果(P<0.01);重組蛋白GAPDH的三個(gè)濃度下的增殖結(jié)果較顯著;其余的四種重組蛋白均有一定的增殖效果,但與對(duì)照組比較均不顯著(P>0.05)。
  4捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)六種酶蛋白對(duì)山羊巨噬細(xì)胞吞噬功能和分泌N

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