八肋游仆蟲中心蛋白片段分子與金屬離子作用的光譜研究.pdf

1、中心蛋白(centrins)是一種約20kDa的酸性鈣結合蛋白，屬于鈣調(diào)蛋白大家族。中心蛋白廣泛存在于真核生物中，如藻類、酵母、原生動物、高等植物、哺乳動物等。中心蛋白在中心粒的復制和中心基體纖維的收縮中起重要的作用，與細胞中纖維的收縮、細胞的分裂等密切相關。到目前為止，關于中心蛋白的研究主要集中在其生物功能和結構上。 近年來，稀土資源的不斷開發(fā)和利用增加了稀土元素進入生命體的途徑和機會，這使得稀土元素長期使用的安全性和對生物功

2、能的影響受到人們的普遍重視。鈣離子與稀土離子具有相近的配位環(huán)境和配位結構，因此，稀土元素進入食物鏈必將影響鈣離子作用的發(fā)揮。中心蛋白含有四個EF-hand結構域，每個結構域均可結合一個鈣離子，所以它可能是稀土離子在生物體內(nèi)實現(xiàn)其生物效應的載體。 原生動物八肋游仆蟲(Euplotesoctocarinatus)是一種進化上處于特殊地位的單細胞真核生物，對該生物的中心蛋白的研究，有助于闡明低等真核生物的細胞分裂、細胞運動等重要生命活

3、動過程的本質(zhì)。本文應用分子生物學的方法表達、純化得到了純度較高(90％以上)的中心蛋白分子片段P12(含1、2兩個EF手結構域，也簡稱為N-EoCen)和P23(含2、3兩個EF手結構域)。并運用GenePro給出了它們的一些參數(shù)，諸如分子量、等電點、凈電荷量、摩爾消光系數(shù)等。以期對后續(xù)研究起到理論性指導作用。 應用鋱敏化熒光法我們得到了Tb3+與P12的條件結合常數(shù)，而后應用鋱的條件結合常數(shù)和離子競爭法，分別求得了Ca2+和M

4、g2+與P12的相對結合常數(shù)。并得到了鋱與P12的反應熱力學數(shù)據(jù)，反應的⊿rG＜0，說明鋱與P12的結合反應能夠自發(fā)進行，而由⊿rH＜0，⊿rS＞0說明鋱與Pi2的結合作用力主要為靜電作用力。 最后以TNS作為疏水熒光探針，研究了P12、P23結合幾種金屬后構象變化的情況。結果表明，金屬的離子勢越大，對蛋白的構象變化影響也越大。并計算得到了幾種金屬結合形式下與TNS的條件結合常數(shù)。共振光散射研究表明，P12由于含有全分子的氨基端