HCV免疫學診斷抗原與鏈親和素融合蛋白的制備及應用研究.pdf

1、丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）主要以血液和性傳播，其感染后，極易發(fā)展為慢性丙型肝炎，部分患者進一步轉化為肝硬化或肝細胞癌，嚴重危及人們的生命[1]。其發(fā)病隱匿，癥狀不典型，加之公眾對其認知水平較低，因此病毒的傳播不易控制，患者也容易因不能及時診斷而錯過治療的最佳時機。因此，及時對HCV相關指標進行檢測，對于控制HCV傳播、早期診斷以及提高治療效果有著至關重要的意義。
　　 HCV抗體檢測誕生于20世紀90

2、年代初，是最早用于HCV實驗室診斷的方法，具有操作簡便、耗時短等優(yōu)點，被廣泛運用于血液制品的篩查和臨床診斷。最常用的抗-HCV診斷試劑采用間接酶聯免疫法(ELISA)，根據包被抗原的組成和質量的不同，抗-HCV檢測試劑的發(fā)展經歷了三代。目前我國最常采用的是第三代抗-HCVELISA試劑，其質量雖較前兩代已有很大提高[2]，但仍然存在一定程度的漏檢和假陽性[3.4]
　　 本論文的設計思路是：利用鏈親和素(SA)與生物素能高效、特

3、異結合的特性，制備HCV免疫學診斷抗原與SA的融合蛋白，并初步探討其在抗-HCVELISA檢測中的應用，以期達到更好的檢測效果。
　　 方法：構建了HCV免疫學診斷抗原(C44P)與鏈親和素(SA)融合蛋白重組表達質粒pET-11d-C44P-SA，在大腸桿菌BL21(DE3)中表達，并用Westernblot進行鑒定，表達的融合蛋白經鎳金屬螯合(Ni-NTA)層析柱進行純化，透析復性后分別包被生物素化以及普通酶聯板，進行人血清

4、抗-HCV檢測。
　　 結果：成功構建了帶有SA標簽的重組表達質粒，其在大腸桿菌BL21(DE3)中實現高效表達，制備的融合蛋白純度可達90％以上，建立ELISA法進行人血清抗-HCV檢測顯示：融合蛋白包被生物素化酶聯板的檢測靈敏度與特異性明顯高于普通酶聯板。
　　 結論：構建的融合蛋白作為包被抗原，利用SA標簽與生物素化酶聯板的高效、特異結合，提高了抗-HCV檢測的靈敏度與特異性，為進一步提高抗-HCV檢測試劑的質量打