低頻超聲聯(lián)合微泡提高前列腺癌微環(huán)境中抗腫瘤免疫效應的體外實驗研究.pdf

1、目的：本研究揭示血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在前列腺癌微環(huán)境中對樹突狀細胞分化的潛在影響；并通過低頻超聲聯(lián)合微泡抑制前列腺癌RM-1細胞中的VEGF表達，探究DCs和脾源性T細胞的表型改變及其與低頻超聲在前列腺癌微環(huán)境中的協(xié)同抗腫瘤作用。
　　方法：首先檢測小鼠前列腺癌RM-1細胞中VEGF mRNA的表達水平，采用質粒轉染的方法下調其表達，并與BALB/c小鼠

2、骨髓源性DCs共培養(yǎng)，通過DCs表型改變判斷成熟狀態(tài)及變化。隨后采用正交設計法優(yōu)化低頻超聲聯(lián)合微泡抑制RM-1血管內皮生長因子表達的最佳參數(shù)組合，并在細胞膜損傷和蛋白表達水平進行分組驗證實驗。最后采用尼龍毛柱法獲取BALB/c小鼠脾源性T細胞，與低頻超聲聯(lián)合微泡輻照后的RM-1和骨髓源性DCs共培養(yǎng)后通過免疫細胞的表型改變判斷其分化狀態(tài)。并從抑制RM-1細胞遷移運動能力、細胞增殖能力和侵襲能力三個方面初步探究體外低頻超聲聯(lián)合微泡協(xié)同前列

3、腺癌微環(huán)境中抗腫瘤免疫的作用。
　　結果：小鼠骨髓源性DCs與RM-1共培養(yǎng)后CD11c和CD83表達陽性率均有所下降；采用下調VEGF表達后的RM-1共培養(yǎng)，可提高CD83(+)DCs比例；根據(jù)正交設計實驗可知，抑制RM-1中VEGF表達的最優(yōu)聲空化參數(shù)組合為：超聲頻率800kHz，超聲功率360mW/cm2，輻照時間30s，微泡/細胞懸液體積比20%。尼龍毛柱法可獲得小鼠脾源性T淋巴細胞，與RM-1和DCs共培養(yǎng)后，免疫細胞中

4、CD11c、CD83、CD4、和CD8a的表達水平均有所降低，而共培養(yǎng)前采用低頻超聲聯(lián)合微泡輻照RM-1可提高共培養(yǎng)體系中CD11c（+）DCs和CD8a（+）T淋巴細胞的比例；且輻照并與免疫細胞共培養(yǎng)后，RM-1細胞遷移數(shù)量最少、增殖和侵襲能力最弱。
　　結論：小鼠前列腺癌微環(huán)境中DCs和成熟DCs的分化均受到抑制，而下調VEGF的表達可以促進成熟DCs的分化。低頻超聲聯(lián)合微泡可顯著抑制小鼠前列腺癌細胞RM-1中VEGF表達，并