CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義.pdf

1、宮頸癌（cervicalcancer）是發(fā)生在宮頸鱗狀上皮細胞和宮頸管內(nèi)膜的柱狀上皮細胞交界處的惡性腫瘤。隨著對女性健康關(guān)注的日益增加，宮頸癌被認為是導(dǎo)致女性死亡的第二大惡性腫瘤，發(fā)病率逐年增高，目前僅次于乳腺癌，是女性常見的重大疾病之一。
　　越來越多的報道指出，機體的炎癥感染是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展的首要因素。但并不是所有的炎癥都能發(fā)展成為腫瘤。這與機體的免疫調(diào)節(jié)以及宮頸的微環(huán)境變化有著密切的關(guān)系。有流行病學調(diào)查結(jié)果指出：人乳頭瘤病

2、毒（humanpapillomavirus,HPV)感染能夠持續(xù)作用于宮頸上皮細胞，并使宮頸上皮細胞適應(yīng)的宮頸微環(huán)境被破壞，最終能夠?qū)е聶C體免疫應(yīng)答平衡失調(diào)。另有報道指出：在世界不同地區(qū)，宮頸癌合并高危型HPV感染率為86％-94%，其中以16、18型感染最為常見。越來越多的證據(jù)表明，高危型HPV感染與宮頸癌及癌前病變的發(fā)病有著密切的關(guān)系。免疫功能是機體識別和排除抗原性異物，維持機體生理平衡的重要機制，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。宮頸癌患

3、者在慢性炎癥的刺激下導(dǎo)致機體的免疫調(diào)節(jié)及宮頸微環(huán)境發(fā)生變化。這一系列的變化是如何形成的？機體在面對炎癥刺激如何清除病毒感染？腫瘤細胞在形成的過程中如何逃避機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視？近年來這些問題越來越受到人們的重視。
　　宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤微環(huán)境中局部浸潤淋巴細胞的組成和數(shù)量的變化密切相關(guān)，大量研究表明腫瘤內(nèi)或癌灶周圍的淋巴細胞浸潤程度與患者的預(yù)后有關(guān)。淋巴細胞是機體抵抗腫瘤細胞重要途徑，在腫瘤組織中，淋巴細胞浸潤的數(shù)量可以為腫瘤

4、預(yù)后的判斷提供依據(jù)。腫瘤浸潤性淋巴細胞（tumorinfiltratinglymphocyte,TIL）為一類具有腫瘤浸潤性且具有抗原反應(yīng)效應(yīng)的細胞群，它是一種新型的具有腫瘤殺傷作用的效應(yīng)性T細胞，具有高效性、特異性強、副作用相對較小等特點，由Rosenberg等學者于1986年由荷瘤小鼠腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)并成功分離出來。TIL主要包含的是T細胞亞群，同時也包含了B細胞和NK細胞,其表型上主要分為CD4+、CD8+T細胞。CD4+T淋巴細胞

5、主要在機體免疫中起監(jiān)視作用，可以通過識別腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，找到腫瘤細胞，并誘導(dǎo)其他免疫細胞（常見的有B細胞、具有自然殺傷作用的細胞、巨噬細胞、以及細胞毒T細胞等）并使這些細胞被激活，并且和這些細胞共同發(fā)揮抗腫瘤的作用。另外，CD4+T淋巴細胞還能夠釋放多種的細胞因子，這些細胞因子也能參與機體的抗腫瘤免疫應(yīng)答。CD8+T細胞也有很多亞型，其中細胞毒性T細胞（cytotoxicTcell，CTL）除了能夠?qū)Π屑毎M行清除以外，能對腫

6、瘤細胞及一些被特定病毒感染的細胞進行識別并有殺傷作用。因此，CD8+T細胞的數(shù)量決定了其殺傷腫瘤細胞的能力，其數(shù)量的多少決定了殺傷靶細胞的整體效率。TIL中CD4+CD25+T細胞是一種對免疫系統(tǒng)起抑制作用的調(diào)節(jié)性T細胞(regulatoryTcell，Treg)，而叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子（Forkhead/wingedhelixtranscriptionfactor，F(xiàn)oxp3）能夠?qū)reg細胞的發(fā)育和功能控制起著關(guān)鍵的做用。F

7、oxp3+T淋巴細胞能通過基因轉(zhuǎn)錄水平降低促炎因子的表達，并升高免疫抑制因子的表達，從而達到免疫抑制功能。
　　近年來人們對CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細胞在腫瘤細胞免疫中的作用給予了很大的關(guān)注。研究CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細胞在宮頸癌微環(huán)境中的浸潤情況對了解宮頸癌局部微環(huán)境的變化及宮頸癌的診治和預(yù)后有重要的臨床意義。本研究應(yīng)用免疫免疫組織化學的方法分別檢測CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織及正常宮頸組

8、織中的表達情況及三者間的關(guān)系，進一步探討宮頸微環(huán)境中CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細胞浸潤情況，為臨床治療宮頸癌及評估其預(yù)后提供依據(jù)。
　　方法：
　　1．臨床病理資料
　　收集2012年7月至2014年7月鄭州大學第一附屬醫(yī)院婦科進行手術(shù)切除或活檢的宮頸組織石蠟標本共75例，其中正常宮頸組織12例，宮頸癌63例。宮頸癌組依據(jù)2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(internationalfederationofgynec

9、ologyandobstetrics，F(xiàn)IGO)的臨床分期標準:宮頸癌I期21例;II期17例;III期20例；IV期5例。
　　2.免疫組織化學
　　蠟塊行4μm厚連續(xù)切片，按常規(guī)方法脫蠟水化并微波修復(fù)抗原，采用免疫組化SP法檢測,按試劑說明書進行操作,一抗為鼠單克隆抗體Foxp3（工作濃度為1:100）,兔單克隆抗體CD8（工作濃度為1:500），兔單克隆抗體CD4（工作濃度為1:250），室溫孵育切片過夜，生物素化兔/

10、鼠通用型IgG(1:200)室溫孵育60min；以DAB顯色，蘇木素輕度復(fù)染。用PBS液代替第一抗體設(shè)為陰性對照，選用已證實為CD4、CD8、Foxp3陽性的切片設(shè)為陽性對照。
　　3.統(tǒng)計學處理
　　應(yīng)用SPSS17.0進行統(tǒng)計學分析。兩個樣本均數(shù)的比較采用兩樣t檢驗，多樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析；多個樣本率的比較采用（行×列）表χ2檢驗。各檢驗方法均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1

11、.陽性著色為棕黃色顆粒，CD4、CD8位于T淋巴細胞膜或細胞漿，F(xiàn)oxp3陽性染色主要位于T淋巴細胞核內(nèi)，少數(shù)在細胞膜中顯色。CD4在宮頸癌組織中的陽性表達率（46%）明顯低于正常宮頸組織中的陽性表達率（100%），差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CD8在宮頸癌組織中的陽性表達率（36.5%）明顯低于正常宮頸組織中的陽性表達率（100%），差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Foxp3宮頸癌組織中的陽性表達率（77.8%）明顯高于正

12、常宮頸組織中陽性的表達率（8.33%），其差異具有統(tǒng)計學的意義(P<0.05)。
　　2.宮頸癌組織中所含CD4、CD8T細胞的表達均與Foxp3的表達呈負相關(guān)（r1=-0.470,r2=-0.538,P均<0.05），CD4和CD8的表達呈正相關(guān)（r=-0.538,P<0.05）。
　　3.CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織中的表達與患者年齡、病灶大小及HPV感染型別無關(guān)(P>0.05)，與FIGO分期、組織學分級相關(guān)

13、。與早期（I、II期）宮頸癌組織相比，中晚期（III、IV期）宮頸癌組織中CD4、CD8陽性表達率較低（P均<0.05），F(xiàn)oxp3陽性表達率較高(P<0.05)。與組織分化程度低（G1~G2）的宮頸癌組織相比，組織分化程度較高（G3）的宮頸癌組織中CD4、CD8陽性表達率較高（P均<0.05），F(xiàn)oxp3陽性表達率較低(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.宮頸微環(huán)境中CD4+、CD8+T淋巴細胞減少或缺失削弱了機體對宮頸