罕見地中海貧血規(guī)范化基因診斷臨床評價及一種地中海貧血新突變基因的鑒定.pdf

1、第一章罕見地中海貧血規(guī)范化基因診斷臨床評價
　　目的：(1)對廣東省婦幼保健院醫(yī)學遺傳中心目前的罕見地貧規(guī)范化基因診斷流程進行效果評價，為其進一步臨床推廣與實施提供依據(jù)；(2)初步了解廣東省罕見地貧基因分子流行病學情況。
　　方法：(1)回顧分析2013年1月至2015年6月廣東省婦幼保健院醫(yī)學遺傳中心罕見地貧基因診斷情況。規(guī)范診斷流程為：對表現(xiàn)為MCV≤82fl且HbA2≤2.5％的標本進行--FIL，--THAI和α-珠

2、蛋白基因測序分析；對MCV≤82fl且HbA2≥3.5%的標本進行β珠蛋白基因測序分析；對HbF增高的標本進行Yunnanese(Aγδβ)0、ChineseGγ(Aγδβ)0和SEA-HPFH檢查；對異常血紅蛋白的標本進行α/β珠蛋白基因測序檢查。將338例研究對象分為規(guī)范診斷組(209例)與未規(guī)范診斷組(129例)，比較兩組的陽性率；對未規(guī)范診斷組不規(guī)范的原因加以分析，發(fā)現(xiàn)存在的問題，找出病因；采用SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析

3、；(2)對2011年廣東省地中海貧血流行性現(xiàn)況基線調(diào)查樣本進行罕見地貧基因檢測，共從14332個家庭中采集了男性外周血13148份，其中15.9%常規(guī)地貧基因檢測為陽性，我們對余下血液學初篩陽性，而常規(guī)基因檢查呈陰性的進行罕見地貧基因型的分析。根據(jù)血常規(guī)及血紅蛋白電泳結果，對研究對象進行分類：α-地貧特征組(MCV≤82fl且HbA2≤2.5%)，β-地貧特征組(MCV≤82fl且HbA2≥3.5%)，HbF增高組(HbF≥5.0%)，

4、異常血紅蛋白組。按罕見地貧基因規(guī)范化診斷流程進行檢測。
　　結果：(1)規(guī)范診斷組確診陽性率顯著高于未規(guī)范診斷組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)；(2)檢測項目的錯檢、漏檢及不合指征是造成未規(guī)范檢查的主要原因，導致醫(yī)療資源的浪費和確診陽性率的下降；(3)漏檢錯檢項目反應了醫(yī)務人員對罕見地貧基因的檢測項目與臨床癥狀的相關性理論知識掌握有偏頗，可能存在宣傳與培訓不足的問題；(4)基線調(diào)查中，α-地貧特征組檢出了4例陽性，檢出率為4

5、/200(2%)；β-地貧特征組檢出了9例陽性，檢出率為9/28(32.14%),；HbF增高組檢出了4例陽性，檢出率為21.05%(4/19)；異常血紅蛋白的檢出率為43/43(100%)，總共額外增加了60例地貧基因陽性，檢出率為20.69%，包括--THAI/2例，突變型α-地貧2例，ChineseGγ(Aγδβ)01例，SEA-HPFH3例，突變型β-地貧9例，HbQ-Thailand11例，HbNewYork18例，HbG-C

6、hinese6例，HbJ-Bangkok6例，另外還有HbJ-Baltimore和HbOkayama各1例。
　　結論：(1)我院罕見地中海貧血的規(guī)范化基因診斷的制定與實施臨床應用效果良好，可降低漏診誤診率，顯著提高醫(yī)療質(zhì)量。在以后推廣的過程中，應注意加強醫(yī)務人員的學習與簡化流程，使罕見地貧基因診斷流程能更好地服務臨床；(2)雖然本研究的樣本量不足以分析罕見地貧基因的攜帶率，但是我們希望提供一個較大樣本中這些罕見地貧基因型的檢出情

7、況，為以后全省罕見地貧基因攜帶率調(diào)查的樣本估算等打下基礎；(3)本研究發(fā)現(xiàn)了2例中國人群首次報道的罕見的異常血紅蛋白類型：HbJ-Baltimore和HbOkayama，豐富了中國人群異常血紅蛋白基因的種類。
　　第二章一種地中海貧血的新突變基因鑒定
　　目的：目前已有50余種缺失型α-地貧類型被報道，缺失范圍從2.4kb到整個α-珠蛋白基因簇不等。本研究擬對一例新發(fā)現(xiàn)的導致α0-地貧的44.6kb缺失突變家系進行基因型鑒定

8、。
　　方法：采集臨床上一例表型為α0-地貧但α-珠蛋白基因常見缺失與突變檢測及第一章提及的罕見地貧基因診斷-檢測均提示為陰性的先證者及其家庭成員的外周血。采用MLPA方法檢測珠蛋白基因拷貝數(shù)變化。為了更好地描述斷裂位點，我們針對α-珠蛋白基因簇基于Agilent的芯片技術定制了一款CustomCGH芯片。根據(jù)CGH結果設計Gap-PCR引物，將擴增的特異DNA片段進行Sanger測序分析。
　　結果：MLPA分析α-珠蛋白

9、基因拷貝數(shù)，發(fā)現(xiàn)先證者存在大片段缺失，無法確定斷裂位點。CustomCGH結果顯示先證者16號染色體發(fā)生大片段缺失，缺失區(qū)域為(hg19)chr16:194277-237673。通過Gap-PCR和Sanger測序驗證確定，缺失區(qū)域為：(hg19)chr16:194214-238840，缺失大小為44627bp。對家系其他成員分析，推測大片段缺失遺傳自父親，家系其他成員未攜帶該基因。該缺失片段移除了α-珠蛋白基因簇上的所有功能基因，使α