華南地區(qū)肉芽腫性小葉性乳腺炎的細菌學研究.pdf

1、肉芽腫性小葉性乳腺炎（granulomatous lobular mastitis，GLM），是一種發(fā)生于乳腺小葉、以肉芽腫形成為主要特征的乳腺慢性炎性疾病。通常表現(xiàn)為乳房腫物，伴有疼痛，皮膚呈現(xiàn)出紅腫、潰瘍、竇道等急慢性炎癥反應，影像學和臨床上很容易與乳腺癌，特別是炎性乳腺癌相混淆。因此，對GLM的鑒別診斷和對癥治療是預防與治療乳腺疾病的一個難題。目前對GLM的病理表現(xiàn)和疾病的發(fā)展進程認識不足，對該病的病因和發(fā)病機制也缺乏深入了解，導

2、致臨床上對GLM的治療帶來盲目性，誤診誤治的病歷并不少見，對患者的身體與身心健康帶來嚴重的影響。本實驗擬對華南地區(qū)GLM患者的膿液標本和組織標本為研究對象，試圖找出引起該地區(qū)GLM的潛在致病菌，并且對其進行鑒定和分析，并結合文獻分析不同地區(qū)GLM的致病菌的異同。利用細菌培養(yǎng)、革蘭氏染色和細菌16S rDNA序列測定的技術鑒定華南地區(qū)GLM的潛在致病細菌，通過系統(tǒng)發(fā)育分析的方法，構建細菌特定的系統(tǒng)發(fā)育樹，從而確定細菌的分類地位。本實驗有望

3、為GLM的病因和發(fā)病機制提供一定的理論依據(jù)。
　　方法：選擇2014年6月至2016年6月于中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院乳腺科門診就診及住院的華南地區(qū)肉芽腫性小葉性乳腺炎患者，在手術室無菌條件下取得的32份標本，其中膿液標本14例，組織標本18例。
　　將收集到的14例膿液標本分別接種于血瓊脂平板培養(yǎng)基，在37℃恒溫，5％CO2培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)48h以上。若培養(yǎng)呈陽性，則進行革蘭氏染色。將培養(yǎng)呈陽性的細菌和收集到的18例GLM患者的

4、組織標本進行總DNA的提取，采用細菌特異性的引物，PCR擴增細菌16S rDNA序列，克隆建庫后進行序列測定，測序結果跟NCBI基因數(shù)據(jù)庫進行比對，利用MEGA軟件進行系統(tǒng)發(fā)育分析，確定細菌的分類地位。
　　結果：對華南地區(qū)14例GLM患者的膿液標本進行細菌培養(yǎng)，兩天后發(fā)現(xiàn)只有4例標本能夠在培養(yǎng)基上長出菌落，膿液的細菌檢出率為28.57%。長出的菌落細小光滑，將細菌進行革蘭氏染色，在油鏡下觀察到細菌呈桿狀，且呈紫色，可初步判定為革

5、蘭氏陽性桿菌。將測序得到的細菌16S rDNA序列與 NCBI基因數(shù)據(jù)庫進行比對，其中兩例與數(shù)據(jù)庫上C.kroppenstedtii的相似度達到99.9%；另外兩例分別與數(shù)據(jù)庫上M.abscessus和P.avidum的相似度也高達100%。采用鄰接法（Neighbor-Joining，NJ）計算及構建系統(tǒng)發(fā)育樹進行系統(tǒng)發(fā)育分析，從分子系統(tǒng)發(fā)育水平上支持了這四例細菌的分類地位。
　　對華南地區(qū)18例GLM患者的組織標本進行 HE染

6、色，發(fā)現(xiàn)GLM周圍有乳腺導管擴張癥，導管內有炎性滲出物與分泌物，周圍可見淋巴細胞、漿細胞浸潤。分別提取18例GLM組織標本的總DNA，全部提取成功，然而只有兩例標本能夠成功PCR擴增細菌16S rDNA序列，對16S rDNA序列進行克隆建庫，測序。將測序得到的細菌16S rDNA序列與NCBI基因數(shù)據(jù)庫進行比對，發(fā)現(xiàn)其中的一例與國際基因數(shù)據(jù)庫上T.aquatica的相似度達到99.9%；另一例與數(shù)據(jù)庫上C.amycolatum的相似度

7、也為99.9%。應用DNAClub、MEGA軟件進行序列分析和系統(tǒng)發(fā)育分析，構建細菌的系統(tǒng)發(fā)育樹，從分子系統(tǒng)發(fā)育水平上支持了這兩例細菌的分類地位。
　　結論：基于本實驗研究的華南地區(qū)32例GLM標本，初步確定該地區(qū)GLM與細菌C.kroppenstedtii、M.abscessus、P.avidum、C.amycolatum和T.aquatic具有相關性。通過細菌培養(yǎng)和不依賴于培養(yǎng)的分子生物學方法能夠對華南地區(qū)GLM相關的細菌進行