兔關節(jié)軟骨細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定.pdf

1、目的：優(yōu)化兔關節(jié)軟骨細胞分離方法，探索其體外單層培養(yǎng)過程條件及端粒、生物學功能學特性的變化。
　　 方法：選用4周齡雄性、健康、新西蘭大白兔的關節(jié)軟骨，采用機械、雙酶消化法進行分離得到關節(jié)軟骨細胞。測定細胞存活率，并在含有10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中進行體外單層培養(yǎng)。待細胞融合率達到85%至90%時，用胰蛋白酶消化收集并以相同密度鋪板傳代。逐代觀察細胞形態(tài)及應用MTT法繪制細胞生長曲線：同時采用甲苯胺藍染色和RT-PCR

2、方法動態(tài)研究各代關節(jié)軟骨細胞的蛋白多糖，Ⅰ、Ⅱ型膠原蛋白與端粒酶因水平的表達變化。
　　 結果：本方法兔關節(jié)軟骨細胞收集過程簡便、高效，平均每克軟骨可得到2×106個細胞。在體外單層培養(yǎng)的過程中，隨傳代次數(shù)增加，軟骨細胞傳代時間變長，細胞形態(tài)逐漸向“纖維樣”細胞轉化。Ⅰ型膠原蛋白基因水平的表達呈遞增趨勢，Ⅱ型膠原蛋白與端?；蛩降谋磉_呈遞增趨勢，細胞外基質(zhì)蛋白多糖逐漸減少。前三代細胞具有較高的生物學及功能學特性表達，四代后主要