微管相關(guān)蛋白1輕鏈蛋白3家族翻譯后修飾方式的研究.pdf

1、自噬現(xiàn)象是一種高度保守的細胞行為,幾乎在所有的物種中都存在.已經(jīng)在細胞的脅迫反應(yīng),細胞的凋亡和死亡以及很多疾病組織中都發(fā)現(xiàn)了自噬囊泡異常的現(xiàn)象.大鼠微管相關(guān)蛋白輕鏈3(Map1lc3)蛋白是第一個在哺乳運動細胞中鑒定的定位在自噬體膜上的蛋白.它在體內(nèi)同時以兩種不同分子量的形式存在.其中18KDa的Map1lc3蛋白是微管相關(guān)蛋白1的輕鏈亞基,稱為Lc3-I;另一種16KDa的Map1lc3蛋白則是自噬體膜的必須組分,稱為Lc3-II.L

2、c3-I和Lc3-II都是一系列翻譯后修飾的產(chǎn)物,其中特征性的修飾是保守Gly120后發(fā)生的羧基端切割,此切割修飾對Lc3-II定位于自噬體膜尤為重要.我們研究發(fā)現(xiàn)在大鼠,小鼠和人中MAP1LC3主要以兩種型存在,LC3A型和LC3B型.在HEK293細胞中分別表達這三個物種中的所有的A型、B型以及人MAP1LC3C分子,發(fā)現(xiàn)除了人的MAP1LC3B外其它同源物的修飾方式與已知的酵母Apg8和大鼠的LC3修飾方式相類似,均發(fā)生了羧基端的

3、切割反應(yīng)而且羧基端保守的甘氨酸是它們發(fā)生翻譯后修飾的活性位點.而人的MAP1LC3B明顯的與它們不同,用抗Myc表位的單抗進行western blot分析時僅檢測到一條單一的16KDa蛋白條帶.進一步分析表明人MAP1LC3B并沒有發(fā)生羧基端的切割反應(yīng)而且羧基端的賴氨酸代替了保守的甘氨酸成為人MAP1LC3B發(fā)生修飾的活性位點.我們通過超速離心和免疫熒光技術(shù)證明人的三個基因均定位在自噬體膜上.人LC3A的膜定位于Gly120位點的切割和