Bcl-2突變體對(duì)線(xiàn)粒體和細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、細(xì)胞凋亡(apoptosis)，又稱(chēng)程序性細(xì)胞死亡，是指細(xì)胞接受某種信號(hào)或受到刺激后的一種細(xì)胞主動(dòng)性死亡過(guò)程，是受細(xì)胞內(nèi)基因高度程序化調(diào)控的死亡形式。人體內(nèi)每天都有數(shù)以?xún)|計(jì)的細(xì)胞誕生，同時(shí)又有數(shù)以?xún)|計(jì)的細(xì)胞死亡，兩種過(guò)程處于一種動(dòng)態(tài)平衡之中，平衡一旦被打破就可能導(dǎo)致腫瘤或者自身免疫和退行性疾病的產(chǎn)生。
　　 Bcl-2蛋白家族是調(diào)控細(xì)胞凋亡過(guò)程中非常重要的蛋白家族，根據(jù)功能和結(jié)構(gòu)分為分為兩類(lèi)，抑凋亡蛋白和促凋亡蛋白。Bcl-2蛋

2、白是一個(gè)是抑凋亡蛋白，有九個(gè)螺旋，第九個(gè)螺旋插入線(xiàn)粒體膜，當(dāng)有凋亡刺激時(shí)，Bcl-2發(fā)生構(gòu)象改變，第五螺旋和六螺旋插入線(xiàn)粒體膜和相關(guān)凋亡蛋白相互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。
　　 目前已經(jīng)有體外試驗(yàn)證明，Bcl-2蛋白能夠在脂質(zhì)體上形成小孔道，只允許小分子顆粒通過(guò)。通過(guò)定點(diǎn)突變的Bcl-2蛋白可以在脂質(zhì)膜上形成寡聚體且能釋放較大的顆粒。且有實(shí)驗(yàn)證明與Bcl-2蛋白同源的抑凋亡蛋白Bcl-xL的定點(diǎn)突變可以在Bax/Bak-/-的細(xì)胞中引起

3、細(xì)胞凋亡。據(jù)此我們就提出了一個(gè)假設(shè)Bcl-2蛋白經(jīng)過(guò)點(diǎn)突變是否也能夠像Bcl-xL蛋白那樣從一個(gè)抑凋亡蛋白轉(zhuǎn)換為促凋亡蛋白。
　　 根據(jù)結(jié)構(gòu)信息學(xué)，第五螺旋和六螺旋可能會(huì)在結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化其非常重要作用，因此我們集中把Bcl-2蛋白第五螺旋和六螺旋上的氨基酸做了系列突變，通過(guò)大量細(xì)胞凋亡篩選實(shí)驗(yàn)、免疫熒光定位功能檢測(cè)發(fā)現(xiàn)一些Bcl-2的突變體使線(xiàn)粒體形態(tài)發(fā)生較大的改變，且能夠在HeLa細(xì)胞和Bax/Bak-/-的細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生。

4、進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)這種不依賴(lài)于細(xì)胞內(nèi)Bax和Bak促凋亡蛋白發(fā)生的細(xì)胞凋亡是通過(guò)經(jīng)典的內(nèi)源凋亡途徑發(fā)生的，伴隨著細(xì)胞色素C的釋放以及pro-caspase9和pro-caspase3的切割等。通過(guò)構(gòu)象改變和交聯(lián)實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了Bcl-2突變體蛋白在細(xì)胞凋亡過(guò)程中確實(shí)發(fā)生了構(gòu)象變化，表明Bcl-2突變體可能通過(guò)構(gòu)象變化來(lái)使其功能發(fā)生轉(zhuǎn)換，從而使Bcl-2蛋白能夠從抑凋亡蛋白轉(zhuǎn)變成促凋亡蛋白。這給了我們研究Bcl-2家族蛋白在細(xì)胞凋亡的作用一個(gè)全