洋蔥LFY同源基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、洋蔥(Allium cepaL.)為百合科蔥屬二年生草本植物，有普通洋蔥、分蘗洋蔥和頂球洋蔥三個(gè)變種。洋蔥風(fēng)味獨(dú)特，且有降血壓、降血脂、抗動(dòng)脈硬化和預(yù)防心肌梗塞的作用，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)療和保健領(lǐng)域，市場(chǎng)前景廣闊。洋蔥為綠體春化型植物，如何調(diào)控其抽薹開(kāi)花是長(zhǎng)期困擾其生產(chǎn)和育種的問(wèn)題。LFY基因是植物成花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中各類基因的匯集點(diǎn)，不僅決定著花的形態(tài)，而且影響著開(kāi)花時(shí)間?？寺FY基因，了解其表達(dá)特點(diǎn)，對(duì)以基因工程手段調(diào)控植物抽薹開(kāi)

2、花具有重要的意義。
　　 本研究以普通洋蔥‘1007’品系為試材，采用RACE和同源基因克隆方法分離得到普通洋蔥LFY同源基因cDNA序列和基因組DNA序列，使用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行序列分析，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)普通洋蔥LFY同源基因進(jìn)行時(shí)空表達(dá)檢測(cè);以分蘗洋蔥‘Z-010’品系為試材，采用同源基因克隆法分離得到分蘗洋蔥LFY同源基因cDNA序列，使用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行序列分析，采用半定量RT-PCR技術(shù)對(duì)分蘗洋蔥LFY同

3、源基因進(jìn)行時(shí)空表達(dá)檢測(cè)。
　　 試驗(yàn)結(jié)論歸納如下:
　　 (1)通過(guò)RACE方法克隆得到普通洋蔥LFY同源基因AcLFY，GenBank登錄號(hào)為JX275962。AcLFY基因全長(zhǎng)1285 bp，5'非翻譯區(qū)長(zhǎng)15 bp，3'非翻譯區(qū)長(zhǎng)151 bp，ORF序列全長(zhǎng)1119 bp，編碼372個(gè)氨基酸序列。AcLFY蛋白含有5'-N端脯氨酸富集區(qū)、亮氨酸拉鏈和酸性區(qū)等轉(zhuǎn)錄因子特有的結(jié)構(gòu)特征。
　　 (2)采用同源基因

4、克隆法得到AcLFY基因組序列，序列分析結(jié)果表明，AcLFY基因組序列長(zhǎng)1263 bp，序列中包含2個(gè)內(nèi)含子，大小分別為63 bp和81 bp，Intron1位于基因組序列的第387～450個(gè)堿基之間，Intron2位于基因組序列的第960～1042個(gè)堿基之間。
　　 (3) qPCR檢測(cè)結(jié)果表明，AcLFY基因在洋蔥抽薹初期的花序分生組織中表達(dá)量達(dá)到最大，在花托、花柄以及成形和未成形的花器官中只有微量表達(dá)，開(kāi)花期的葉片中也檢測(cè)

5、到AcLFY的大量表達(dá)，說(shuō)明花器官完全形成后，AcLFY mRNA主要存在于葉片中。隨著花器官的發(fā)生至發(fā)育完成，葉片中AcLFY的表達(dá)呈增多的趨勢(shì)。
　　 (4)同源基因克隆法分離得到分蘗洋蔥LFY同源基因AcADLFY, GenBank登錄號(hào)為JX275963。AcADLFY基因cDNA序列全長(zhǎng)1119 bp，編碼372個(gè)氨基酸序列，含有5'-N端脯氨酸富集區(qū)、酸性區(qū)和亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)，與普通洋蔥AcLFY基因結(jié)構(gòu)域極為相似，二