波形蛋白與DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ在病理性瘢痕中的表達.pdf

1、目的:皮膚燒、創(chuàng)傷后的過度修復(fù)常導(dǎo)致病理性瘢痕的形成,作為主要修復(fù)細胞之一的成纖維細胞,其異常增殖和過度分泌是瘢痕過度增生和持續(xù)存在的主要原因。DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ通過調(diào)節(jié)DNA結(jié)構(gòu)變化在生物體內(nèi)發(fā)揮重要作用,TopoⅡ又分為α和β兩種亞型,TopoⅡα主要存在于增殖的細胞中,參與細胞有絲分裂;TopoⅡβ主要存在于增殖不典型的細胞,通過調(diào)節(jié)染色質(zhì)構(gòu)型變化參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控。二者在病理性瘢痕成纖維細胞中表達,目前尚未見報道。為此,本研究比較

2、了波形蛋白及DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱα、β在病理性瘢痕、成熟瘢痕和正常皮膚中的表達情況,探討TopoⅡ與成纖維細胞生物學(xué)特征的關(guān)系及它們在瘢痕形成中的作用。
　　 方法:標本收集:收集邢臺人民醫(yī)院燒傷整形外科手術(shù)患者病理性瘢痕10例,成熟瘢痕10例,同一患者多余的正常皮膚組織10例作為對照,分組實驗。
　　 蘇木精-伊紅染色:標本固定,石蠟包埋,以5μm厚連續(xù)切片,常規(guī)HE染色,封片。光鏡下觀察各組皮膚結(jié)構(gòu),照相。請病理科專家

3、根據(jù)生物學(xué)特征和病理特征鑒定是否為正常皮膚、病理性瘢痕和成熟瘢痕。
　　 免疫組織化學(xué)(SP法)染色:將標本經(jīng)固定、脫水,石蠟包埋,5μm連續(xù)切片,按常規(guī)方法作波形蛋白、拓撲異構(gòu)酶Ⅱα、β免疫組化。顯微鏡下觀察,照相。檢測波形蛋白、拓撲異構(gòu)酶Ⅱα、β在各組的表達。以雙盲法進行結(jié)果判別,波形蛋白陽性反應(yīng)產(chǎn)物位于細胞漿,拓撲異構(gòu)酶Ⅱα、β陽性反應(yīng)產(chǎn)物定位于細胞核。每組切片取10個高倍視野,計算陽性反應(yīng)物的平均光密度值,結(jié)果以均數(shù)±標

4、準差表示。
　　 統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)分析用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理,進行單因素方差分析,并進行兩兩比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:HE染色:正常皮膚表皮較薄,真皮結(jié)構(gòu)清晰,具有突向表皮的真皮乳頭,結(jié)締組織纖維較細,成纖維細胞呈典型的“指紋狀”生長,平行排列,極性明顯。病理性瘢痕表皮角化嚴重,表皮中的基底層細胞明顯增生,細胞層次增加。真皮層較厚,大量的膠原纖維增生,排列較正常皮膚結(jié)構(gòu)粗大,表現(xiàn)為結(jié)節(jié)狀

5、或漩渦狀不規(guī)則的膠原束,其中可見少許膠原纖維呈片狀的玻璃樣變。膠原纖維束中彌漫分布較多的成纖維細胞及微血管。成纖維細胞胞核接近圓形或三角形,胞漿豐富,排列紊亂,極性消失,有明顯的交叉重疊現(xiàn)象。成熟瘢痕表皮與正常皮膚相似,層次清晰。真皮分層不明顯,真皮內(nèi)膠原纖維明顯多于正常皮膚,但是較病理性瘢痕纖細,分布較規(guī)則,細胞成分少。
　　 波形蛋白免疫組化結(jié)果:正常皮膚內(nèi)波形蛋白陽性細胞較少,主要分布于表皮基底層細胞基底部與真皮交界區(qū),真

6、皮乳頭及真皮乳頭層內(nèi)可見散在陽性細胞,其他部位未見陽性細胞。病理性瘢痕表皮內(nèi)波形蛋白陽性細胞少見,但是真皮乳頭及真皮內(nèi)廣泛分布有波形蛋白陽性細胞,細胞體積較大,胞漿豐富,主要分布于小血管周圍和真皮網(wǎng)織層旋渦狀增生的瘤樣增生的中心部位。成熟瘢痕內(nèi)波形蛋白陽性細胞在表皮基底層及真皮內(nèi)表達明顯多于正常皮膚,但是較病理性瘢痕的染色淺,細胞體積小,且排列較規(guī)則。
　　 TopoⅡα免疫組化結(jié)果:在正常皮膚和成熟瘢痕表皮基底層可見TopoⅡ

7、α陽性細胞,成熟瘢痕表皮基底層表達比正常皮膚稍強,真皮內(nèi)未見陽性細胞。病理性瘢痕表皮基底層細胞內(nèi)TopoⅡα表達明顯降低,呈弱陽性。病理性瘢痕真皮乳頭層小血管周圍可見陽性表達。在網(wǎng)織層增生組織之間,部分血管周圍呈現(xiàn)陽性表達。
　　 TopoⅡβ免疫組化結(jié)果:正常皮膚表皮基底細胞層、棘細胞層、顆粒細胞層均可見陽性細胞,基底層著色相對較深,真皮內(nèi)未見陽性細胞。在成熟瘢痕表皮基底細胞層、棘細胞層和顆粒細胞層均有陽性細胞,數(shù)量較正常皮膚

8、增多,真皮內(nèi)未見陽性染色細胞。在病理性瘢痕表皮可見少量陽性表達細胞,棘細胞層和顆粒細胞層較基底層更明顯。真皮乳頭層未見陽性細胞,真皮網(wǎng)織層內(nèi)結(jié)節(jié)狀或旋渦狀排列的膠原纖維間可見大量染色較深的陽性細胞,細胞大,形態(tài)不規(guī)則。
　　 結(jié)論:
　　 波形蛋白是成纖維細胞特異性的標志,波形蛋白免疫組化結(jié)果顯示在正常皮膚內(nèi)僅有少量表達,而在成熟瘢痕和病理性瘢痕中大量表達,證實成纖維細胞參與創(chuàng)傷愈合及瘢痕形成過程。
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