新基因NELIN的功能研究.pdf

1、NELIN基因是一個利用RT-PCR的方法從臍靜脈mRNA中克隆到的一個新基因,生物信息學分析它與鼠微管連接蛋白(nexilin)具有很高的同源性(91%的氨基酸完全一致),故命名為NELIN(nexilin-like protein).該基因的cDNA全長為2736bp,含有一個從412到1755bp共長1344bp的開放讀碼框,推斷NELIN蛋白含有448個氨基酸殘基,該蛋白76~242位氨基酸含有一個F-actin結合結構域.No

2、rthern雜交發(fā)現該基因存在著幾個轉錄本,主要的一個轉錄本為3.0kb,該轉錄本在心臟和骨骼肌中有非常高的表達,在胎盤,肝,肺和胰臟中有微量表達,在腦和腎臟中沒有檢測到.在八種腫瘤細胞系中(早幼粒白血病HL-60細胞系,宮頸癌細胞系HelaS3株,慢性粒細胞白血病K-562細胞系,淋巴母細胞白血病MOLT-4細胞系,Burkitt's淋巴瘤Raji,結腸腺癌SW480細胞系,肺癌A549細胞系,黑色素瘤G-361細胞系)中,只在Hel

3、a S3和MOLT-4腫瘤細胞系以不同的轉錄本微量表達,在其它六種細胞系中沒有檢測到.本文主要研究了NELIN基因與細胞運動之間的關系.通過與綠色熒光蛋白GFP相融合然后瞬時轉染Hela細胞觀察NELIN基因的亞細胞定位,結果顯示,GFP主要分布在細胞質中,顯示NELIN是一個胞漿蛋白.用免疫熒光染色的方法,同樣證明了這個結果.由于NELIN基因包含有一個F-actin結合結構域,促使我們建立NELIN基因與F-actin之間的聯系.免

4、疫熒光共定位的結果表明,NELIN基因與F-actin分布在胞漿的相同區(qū)域.免疫共沉淀的結果雖然沒有證明兩者直接的相互結合,但證明了NELIN基因與F-actin的相互關聯.通過這種相互關聯提示我們,NELIN基因可能通過調節(jié)細胞骨架的結構影響細胞的運動.進一步的實驗,我們將NELIN基因穩(wěn)定轉染Hela細胞,粘附實驗和Transwell分析發(fā)現穩(wěn)定轉染NELIN基因的Hela細胞的遷移率和粘附率顯著增加.這些結果表明,NELIN基因可