氧化低密度脂蛋白對THP-1源巨噬細胞凋亡的影響及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激機制的相關研究.pdf

1、第一部分不同濃度氧化低密度脂蛋白對THP-1源巨噬細胞凋亡的影響
　　 目的：探討氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)對培養(yǎng)的人單核巨噬細胞THP-1細胞凋亡的影響。
　　 方法：體外培養(yǎng)的人THP-1單核細胞經(jīng)氟波酯（PMA）誘導48小時，使形成巨噬細胞，將分化良好的巨噬細胞分別用不同濃度ox-LDL(0～100μg/ml)培養(yǎng)48 h和用75μg/ml ox-LDL培養(yǎng)THP-1細胞不同時間(0～72h),應用Annex

2、in-V和碘化丙錠雙染色后,用流式細胞儀檢測細胞凋亡，觀察不同濃度ox-LDL對細胞凋亡率的影響。實驗分為以下3組：空白對照組、nLDL組、ox-LDL組（分不同濃度，不同時間）。實驗終止后，通過流式細胞儀來檢測巨噬細胞的凋亡率。
　　 結(jié)果：與空白組及內(nèi)對照組相比，ox-LDL處理后的細胞調(diào)亡率增加,并且呈時間和劑量依賴性,隨著作用時間的延長和濃度的增加,凋亡呈遞增變化。
　　 結(jié)論：ox-LDL可以誘導THP-1源巨

3、噬細胞凋亡,并且呈時間和劑量依賴性。
　　 第二部分 氧化低密度脂蛋白誘導THP-1源巨噬細胞凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激機制的相關研究
　　 目的：探討氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導人單核巨噬細胞THP-1細胞凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激機制，同時選擇P38MAPK信號轉(zhuǎn)導途徑，使用P38MAPK的特異性抑制劑SB203580觀察ox-LDL的作用變化，進一步分析ox-LDL是否通P38MAPK信號轉(zhuǎn)導途徑激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的機制。

4、　　 方法:將分化良好巨噬細胞用100μg/ml的ox-LDL 培養(yǎng)48 h后進行實驗。實驗分為3組：空白對照組、ox-LDL組、ox-LDL+SB203580組(p38 MAPK抑制劑)（5 μmol/L)。實驗終止后，用RT-PCR和Western-blot法測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激指標GRP78、 Caspase-12、CHOP及p38MAPK的表達。
　　 結(jié)果：空白對照組中無GRP78、 Caspase-12、CHOP及p38

5、MAPK蛋白和mRNA的表達，單純ox-LDL組和ox-LDL+SB203580組中GRP78、 Caspase-12、CHOP及p38MAPK蛋白和mRNA的表達均增加，具有顯著性差異（p＜0.05），而ox-LDL+SB203580組和單純ox-LDL組相比，以上mRNA和蛋白的表達有所減少（p＜0.05）。
　　 結(jié)論：1. Ox-LDL可以誘導THP-1源巨噬細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應2.P38MAPK通道抑制劑SB20358