西洋參根cDNA文庫構建及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、西洋參作為一種傳統(tǒng)中藥已有許多年的歷史，近年來國內外學者對西洋參化學、藥理及臨床應用進行了大量的研究，證實其次生代謝物人參皂甙是西洋參生理活性最重要的有效成份，其藥理作用十分廣泛，有抗腫瘤、抗衰老、抗心律失常、抑制細胞凋亡、降糖降脂、改善學習記憶、增強免疫功能和解酒等多方面的作用。目前為止，關于西洋參藥理作用的報道已有許多，但關于西洋參有效成分的生物合成途徑及其調控的基礎研究相對缺乏。為了探討西洋參有效成份的生物合成途徑及其調控機理，保

2、存西洋參的資源信息庫，構建了西洋參根組織全長cDNA表達文庫。并對文庫的質量進行了初步鑒定。 本實驗以西洋參根為研究材料，用Trizol方法提取西洋參根組織總RNA，反轉錄成單鏈cDNA，長距離PCR方法合成雙鏈cDNA;PCR產物經蛋白酶K水解、純化后，用SfiI酶切；將酶切產物進行分級分離，回收0.4kb以上的cDNA組分，并與λTriplEx2載體連接；連接產物經體外蛋白包裝，產生原始文庫；鑒定文庫的滴度和重組效率后，進

3、行文庫擴增。隨機挑取16個噬菌斑，用載體克隆位點兩端的通用引物進行PCR擴增，以檢測所構建的cDNA文庫的質量。經測定該文庫初始滴度為4.03×107pfu/ml，擴增后滴度為1.75×109pfu/ml，重組率為86％。插入片段長度為0.3～2.0kb。同時，由于反轉錄過程中采用附加序列的方法使全長mRNA得到反轉錄，所以得到的cDNA是完整的，完全符合cDNA文庫的要求。本實驗成功構建了西洋參根組織的cDNA文庫。 從文庫

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