質(zhì)子感知受體對(duì)成骨細(xì)胞破骨因子表達(dá)中的作用及其分子機(jī)理研究.pdf

1、骨的代謝是由成骨細(xì)胞(Osteoblast)和破骨細(xì)胞(Osteoclast)共同調(diào)節(jié)。生理或病理的條件下細(xì)胞外或細(xì)胞間會(huì)產(chǎn)生酸性的環(huán)境，酸性條件會(huì)促進(jìn)破骨細(xì)胞的增殖并提高其活性。RANKL是破骨細(xì)胞增殖和激活的一個(gè)重要因子，這個(gè)因子表達(dá)于成骨細(xì)胞表面。相關(guān)研究證明，成骨細(xì)胞在骨形成過(guò)程中除了發(fā)揮形成骨基質(zhì)的作用外，還有促進(jìn)破骨細(xì)胞分化的功能。一些文章也證明酸性不僅增強(qiáng)了破骨細(xì)胞的活力，抑制了成骨細(xì)胞的分化與礦物化，同時(shí)也使的成骨細(xì)胞促

2、進(jìn)破骨細(xì)胞的進(jìn)一步分化成熟。質(zhì)子感知受體GPCR可以感知脂質(zhì)分子以及質(zhì)子，所以在酸性條件下成骨細(xì)胞生理活性的改變與GPCR有一定的關(guān)系。GPCR家族中包含OGR1、GPR4、TDAG8、G2A四個(gè)受體，酸性條件下究竟哪個(gè)受體在發(fā)揮作用以及它的調(diào)控方式是一個(gè)新的研究點(diǎn)。同時(shí)通過(guò)對(duì)其信號(hào)通路的研究不僅在基礎(chǔ)理論方面對(duì)骨代謝途徑提供了新的理論支持，同時(shí)為骨質(zhì)疏松等骨病提供了新的治療靶位點(diǎn)。因此，該研究在理論和實(shí)踐方面都具有重要的意義。

3、　　本研究用Real Time PCR技術(shù)檢測(cè)hFOB的成骨性因子CollagenⅠ、OPG、BMP2、ALP進(jìn)行了檢測(cè)，用ALP試劑盒對(duì)細(xì)胞ALP的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示，酸性條件抑制成骨細(xì)胞的分化和骨化。對(duì)TGF、RANKL、M-CSF幾個(gè)重要的破骨因子也進(jìn)行了qPCR，發(fā)現(xiàn)酸性條件對(duì)破骨性因子的表達(dá)有一定的促進(jìn)作用。通過(guò)對(duì)hFOB進(jìn)行qPCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)TDAG8和GPR4在GPCR中高表達(dá)。分別對(duì)兩個(gè)基因用質(zhì)粒過(guò)表達(dá)之后再對(duì)

4、hFOB的成骨性因子與破骨性因子進(jìn)行了檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)在整個(gè)調(diào)控過(guò)程中TDAG8發(fā)揮的作用更大，GPR4作為一種輔助作用。同樣用ELISA結(jié)果測(cè)得PGE2也參與酸性條件下促進(jìn)破骨細(xì)胞分化的調(diào)控。結(jié)果表明：⑴酸性條件下成骨細(xì)胞的增殖和遷移能力都受到了抑制，同時(shí)形成骨的能力減弱，而促進(jìn)破骨細(xì)胞分化成熟的能力提高。⑵TDAG8和GPR4都參與調(diào)控酸性條件下成骨細(xì)胞的成骨因子和破骨因子的調(diào)節(jié)，分別轉(zhuǎn)染TDAG8和GPR4之后，BMP2和OPG的表