柯里拉京在單純皰疹病毒性腦炎中的抗炎作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分，目的：研究柯里拉京對(duì)HSV-1感染后小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)炎性細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)的影響。
　　 方法：小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2細(xì)胞接種HSV-1制造細(xì)胞模型，MTT法選擇合適的細(xì)胞用藥濃度，細(xì)胞分為正常對(duì)照組、HSV-1感染組、柯里拉京組(20ng/ml)、黃芪多糖組(100ug/ml)、地塞米松組(0.5ug/ml)。使用ELISA法檢測(cè)各組白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素10(IL-10)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)的

2、表達(dá)，采用Griess reagent NO試劑盒檢測(cè)NO表達(dá)。
　　 結(jié)果：病毒感染后，各細(xì)胞因子均明顯上升；柯里拉京干預(yù)后，小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、TNF-α及NO的表達(dá)與病毒組比較減少差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，IL-10升高不顯著。
　　 結(jié)論：柯里拉京通過(guò)減少小膠質(zhì)細(xì)胞促炎因子及炎性介質(zhì)的分泌從而減緩病毒誘導(dǎo)的免疫炎性反應(yīng)。
　　 第二部分，目的：研究柯里拉京干預(yù)對(duì)單純皰疹病毒(HSV-1)誘導(dǎo)的B

3、V2及PC12細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：PC12細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2細(xì)胞接種HSV-1制造細(xì)胞模型，MTT法選擇合適的細(xì)胞用藥濃度，細(xì)胞分為正常對(duì)照組、HSV-1病毒感染組、柯里拉京組(20ng/ml)、黃芪多糖組(100ug/ml)、地塞米松組(0.5ug/ml)，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)12、24、48h時(shí)間點(diǎn)各組BV2及PC12細(xì)胞的凋亡率。
　　 結(jié)果：1. BV2細(xì)胞被病毒感染后，細(xì)胞凋亡率顯著增加，與正常組

4、比較(P<0.05)；與病毒組比較， 柯里拉京組與地塞米松組細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.05)；APS組對(duì)BV2細(xì)胞的凋亡影響較小，表現(xiàn)出其陰性對(duì)照的作用。12、24及48h時(shí)間點(diǎn)均顯示出相似的結(jié)果。2.病毒感染PC12細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率顯著增加，與正常組比較(P<0.05)；與病毒組比較， 柯里拉京組、地塞米松組及APS組細(xì)胞凋亡率降低(P<0.05)。48h時(shí)間點(diǎn)與24h顯示出相似的結(jié)果。而12h時(shí)間點(diǎn)各藥物組未顯示出明顯的抑制作用

5、。
　　 結(jié)論：柯里拉京可以促進(jìn)HSV-1誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2的凋亡，并且能夠抑制病毒誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的凋亡。
　　 第三部分，目的：探討柯里拉京促進(jìn)單純皰疹病毒(HSV-1)誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞凋亡途徑。
　　 方法：BV2細(xì)胞接種HSV-1制造細(xì)胞模型，MTT法選擇合適的藥物濃度，細(xì)胞分為正常對(duì)照組、HSV-1病毒感染組、柯里拉京組(20ng/ml)、黃芪多糖組(100ug/ml)、地塞米松組(0.5ug/

6、ml)，干預(yù)24h后流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)各組caspase-3、caspase-8、 caspase-9、 caspase-12的活性，Western-blot法檢測(cè)細(xì)胞色素C含量。
　　 結(jié)果：1.病毒感染BV2細(xì)胞后，caspase-3的表達(dá)顯著升高，與正常組相比(P<0.05)；與病毒組相比，柯里拉京組及地塞米松組表達(dá)水平顯著增高(P<0.05)；作為陰性對(duì)照，APS干預(yù)后caspase-3表達(dá)降低。2.病毒組與正常組比較cas

7、pase-8的表達(dá)率沒(méi)有明顯差異；與病毒組比較，柯里拉京組及地塞米松組caspase-8的表達(dá)率均明顯提高(P<0.05)；APS組仍然表現(xiàn)出陰性對(duì)照的作用，caspase-8的表達(dá)水平是降低的。3.與正常組相比較，病毒組caspase-9的表達(dá)率顯著升高(P<0.05)；而且柯里拉京組、地塞米松組及APS組caspase-9的表達(dá)率均比病毒組升高(P<0.05)；各組細(xì)胞色素C的表達(dá)與caspase-9表達(dá)的趨勢(shì)一致。4.與正常組比較

8、，病毒組caspase-12的表達(dá)沒(méi)有明顯的升高；地塞米松組與病毒組比較其表達(dá)也沒(méi)有明顯的差異；而柯里拉京組與病毒組比較caspase-12的表達(dá)顯著增加(P<0.05)；APS組與病毒組比較caspase-12也是顯著增加的(P<0.05)。
　　 結(jié)論：凋亡的三個(gè)主要途徑：線粒體途徑、死亡受體途徑及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑，在柯里拉京促進(jìn)HSV-1誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中均發(fā)揮著重要的作用。而HSV-1誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞凋亡主要是通過(guò)細(xì)胞

9、色素C及caspase-9介導(dǎo)的線粒體途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　 第四部分，目的：研究柯里拉京治療單純皰疹病毒性腦炎的可行性，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：Balb/c小鼠顱內(nèi)注射HSV-1制造小鼠單純皰疹病毒性腦炎(herpes simplex encephalitis， HSE)模型，隨機(jī)分成5組：正常組、感染組、柯里拉京組(0.4mg/只)、地塞米松組(2ug/只)、黃芪多糖組(0.8mg/只)。采用ELISA

10、試劑盒檢測(cè)腦組織 TNF-a表達(dá)，硝酸還原酶法檢測(cè)NO含量，通過(guò)HE染色觀察腦組織形態(tài)學(xué)，TUNEL法觀察腦細(xì)胞的凋亡。
　　 結(jié)果：病毒感染后第四天：1. 感染組、柯里拉京組、地塞米松組及黃芪多糖(APS)組TNF-a表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增加(P<0.01)；與感染組比較，柯里拉京組、地塞米松組TNF-a表達(dá)降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(分別為P<0.01、P<0.05)。2. 感染組、柯里拉京組、地塞米松組及黃芪多糖(APS)組NO表達(dá)