IL-15基因佐劑對HIV-1 gag DNA疫苗免疫效應(yīng)的影響.pdf

1、人類免疫缺陷病毒(HIV)感染所致的人類獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS，簡稱艾滋病)在全球的迅速傳播已經(jīng)對人類健康造成了嚴重的威脅，研制安全有效的HIV疫苗可最終解決艾滋病的預(yù)防問題。HIV核酸疫苗一直為研究者所關(guān)注，然而，其免疫效力不強，且效果不持久。因此利用各種免疫佐劑來增強HIV核酸疫苗的免疫效果正在成為艾滋病疫苗研究中的新策略。HIV病毒gag基因編碼的GAG結(jié)構(gòu)蛋白突變率較低，且具有能被Balb/c小鼠識別的特異性T表位，常常

2、被作為HIV疫苗研究中的首選蛋白。而本課題組長期以來對細胞因子白介素(IL)-15的免疫作用和機制進行了深入的研究，發(fā)現(xiàn)lL-15在抗腫瘤免疫中具有增強免疫反應(yīng)的作用。因此，本研究將觀察IL-15作為疫苗佐劑對HIV-1 gag DNA疫苗激發(fā)的機體免疫應(yīng)答的效用，并與IL-2的功能進行比較。 主要研究工作包括： (1)構(gòu)建體外細胞實驗?zāi)Ｐ?，研究IL-15對于CD8+αβT細胞，NK細胞及γδT細胞的增殖活化作用從正常人

3、外周血中分離得到一定純度的CD8+αβ T細胞、NK細胞和γδ T細胞，在IL-2/IL-15與HIV-1 gag蛋白共培養(yǎng)刺激下，結(jié)果顯示IL-15和IL-2均能夠增強NK細胞、γδT細胞和特異性CD8+αβ T細胞的增殖活性和細胞毒活性，而且IL-15刺激NK細胞增殖和細胞毒的作用強于IL-2。ELISpot檢測IL-2/IL-15刺激產(chǎn)生的特異性CD8+T細胞克隆頻率的實驗結(jié)果顯示，IL-15與HIV-1 gag共培養(yǎng)組的細胞顯示

4、了比其它各組高得多的克隆頻率。 (2)建立小鼠實驗?zāi)Ｐ停芯縄L-15 DNA佐劑的的最佳免疫時相和免疫激活效用，并探討IL-15產(chǎn)生長效免疫應(yīng)答的機制將含IL-2基因和IL-15基因的質(zhì)粒分別作為免疫佐劑與HIV-l gag DNA疫苗共同免疫小鼠后，檢測小鼠體內(nèi)的針對HIV-1 gag的免疫應(yīng)答。結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-15 DNA佐劑共免疫能夠增強抗原特異性CD8+T淋巴細胞增殖和IFN-γ分泌。特別是免疫后第3天，以IL-15 D

5、NA佐劑共免疫的小鼠就可以對抗原刺激迅速產(chǎn)生免疫應(yīng)答，說明IL-15可以增強抗原特異性T細胞的效應(yīng)功能并激活記憶性免疫應(yīng)答。此外，IL-15DNA佐劑共免疫還能維持記憶性B細胞的長效抗體分泌水平，從而為機體提供保護性免疫應(yīng)答。 進一步的實驗結(jié)果顯示單獨IL-15 DNA佐劑加強可以成功的增強HIV-1 gagDNA疫苗所誘導(dǎo)的記憶性細胞免疫和體液免疫。在加強注射5周之后，IL-15 DNA佐劑加強組小鼠脾細胞增殖活性和特異性CD

6、8+T細胞克隆頻率開始顯著高出IL-2DNA佐劑加強組和對照組，一直持續(xù)到加強注射之后至少20周。在加強注射20周之后血清中anti-HIV-gag的抗體也保持穩(wěn)定水平。此外，不論共免疫時使用的佐劑是IL-2 DNA還是IL-15 DNA，單獨IL-15：DNA佐劑加強均能增強HIV-1 gag DNA疫苗激發(fā)的細胞免疫應(yīng)答。 流式細胞術(shù)檢測結(jié)果進一步顯示，加強注射后，CD62Lhigh中樞記憶T細胞陽性率增加，提示IL-15可