金魚雌核發(fā)育過程中胚胎蛋白質(zhì)組比較研究及肽質(zhì)譜指紋圖分析方法的優(yōu)化.pdf

1、　　為了進一步研究在金魚雌核發(fā)育過程中不同發(fā)育階段的單倍體和二倍體蛋白質(zhì)表達水平的差異，并闡明單倍體不能正常發(fā)育的機制，本文以遺傳背景一致的金魚雌核發(fā)育單倍體(HE)和二倍體(DE)胚胎的相應尾鰭出現(xiàn)期(為受精后31個小時)的胚胎為材料，每隔2個小時為一個時期，共提取了3個時期的胚胎全蛋白質(zhì)進行蛋白質(zhì)組分析。本論文對單倍體3個時期的胚胎全蛋白質(zhì)(分別為HE-1、HE-2、HE-3)采用雙向凝膠電泳進行蛋白質(zhì)點的分離，獲得了重復性較好的凝

2、膠圖譜，采用PDQUEST2-D軟件分別對HE-1、HE-2、HE-3之間的差異蛋白進質(zhì)進行比較分析，經(jīng)MALDI-TOF和ESI-Q-TOF分析初步鑒定了28個差異蛋白質(zhì)點。通過對這些差異蛋白質(zhì)點的功能分析，發(fā)現(xiàn)3個與眼睛發(fā)育相關的蛋白質(zhì)：Gamma晶狀體蛋白質(zhì)M1-1、Gamma晶狀體蛋白質(zhì)M3、homeodomainprotein(cloneG6)；7與發(fā)育調(diào)控相關的差異蛋白質(zhì)，例如胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白質(zhì)2、Smad2、Met

3、hy1-CpG結(jié)合蛋白質(zhì)2；4個與神經(jīng)發(fā)育相關的蛋白質(zhì)，例如神經(jīng)生長因子β鏈前體、Neuralplakophilin-relatedarm-repeatprotein。另外還鑒定了一些細胞分化與維持、體節(jié)形成、信號傳導等相關的蛋白質(zhì)。 　　據(jù)羅琛研究發(fā)現(xiàn)單倍體胚胎發(fā)育不正常是因為單倍體不能選擇二倍體依賴的調(diào)控系統(tǒng)。本文研究發(fā)現(xiàn)在金魚雌核發(fā)育單倍體發(fā)育過程中，一些對發(fā)育起關鍵作用的蛋白質(zhì)在單倍體上表達下調(diào)的可能原因是編碼這些蛋白質(zhì)的基因

4、未能被選擇表達或表達受阻，從而導致單倍體胚胎發(fā)育過程中一些器官和形態(tài)發(fā)育不正常。另外一些蛋白質(zhì)表達上調(diào)可能表明了單倍體胚胎在尾鰭出現(xiàn)期一些組織、器官的形成。 　　肽質(zhì)譜指紋圖分析是一種常用的蛋白質(zhì)的鑒定方法.為了提高這種方法鑒定蛋白質(zhì)時序列覆蓋率和準確度，本文以6個標準蛋白質(zhì)為分析樣品，對幾種不同的酶解肽段的濃縮、脫鹽和點樣方法進行了檢驗和優(yōu)化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)將酶解肽段的濃縮體積控制在5μl以下和采用10mM檸檬酸銨緩沖液板上脫鹽能提高蛋白