高溫下大黃素對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)、血液指標(biāo)及抗氨氮應(yīng)激的影響.pdf

1、大黃素是從蓼科植物虎杖(Reynoutria japonica Houtt)、大黃(Rheum officinale Baill)等根莖中提取的主要有效單體，其化學(xué)名稱(chēng)為1，3，8-三羥基-6-甲基蒽醌，具有抗菌消炎、抗氧化及清除氧自由基、降血脂、保護(hù)肝臟和免疫調(diào)節(jié)多種功效。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，高溫、氨氮已經(jīng)成為水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖中常見(jiàn)的應(yīng)激因子，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失也越來(lái)越大。本試驗(yàn)以團(tuán)頭魴為研究對(duì)象，針對(duì)南方夏季高溫季節(jié)養(yǎng)殖水

2、質(zhì)易惡化的問(wèn)題，模擬實(shí)際養(yǎng)殖過(guò)程中高溫、高氨氮環(huán)境下病原菌易感染的現(xiàn)象，研究高溫高氨氮應(yīng)激對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)、血液生理、免疫、應(yīng)激蛋白HSPs、組織結(jié)構(gòu)的影響及大黃素的調(diào)控作用，為大黃素在防治魚(yú)病和緩解應(yīng)激方面提供參考依據(jù)。選取300尾健康的團(tuán)頭魴[初均重(7.29±0.01)g]，兩種溫度下(25℃、30℃)分別投喂不添加和添加25 mg/kg大黃素配合飼料，連續(xù)投喂77d后，各組進(jìn)行10 mg/L氨氮應(yīng)激14d，最后各組進(jìn)行嗜水氣單胞菌攻

3、毒試驗(yàn)，研究大黃素抗應(yīng)激與抗病原菌感染的調(diào)控作用。
　　 1、高溫下大黃素對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)及血液指標(biāo)的影響?zhàn)B殖結(jié)束后，測(cè)定團(tuán)頭魴的生長(zhǎng)性能，并采樣檢測(cè)團(tuán)頭魴血液學(xué)指標(biāo)。結(jié)果表明:30℃組，魚(yú)體增重率(WGR)、特定生長(zhǎng)率(SGR)、紅細(xì)胞積壓(HCT)和血漿乳酸脫氫酶(LDH)顯著高于25℃組，餌料系數(shù)(FCR)、臟體比(VSI)、皮質(zhì)醇、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素(UREA)、甘油三酯(TG)顯著低于25℃組（P＜0.05）;大黃

4、素組，SGR、肝體比(HSI)、HCT和LDH顯著高于對(duì)照組，F(xiàn)CR、攝食率(FR)、皮質(zhì)醇顯著低于對(duì)照組(P＜0.05）。溫度和大黃素對(duì)團(tuán)頭魴白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)，三碘甲腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、ALT、葡萄糖、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)無(wú)顯著影響(P＞0.05)，對(duì)總膽固醇(TC)、補(bǔ)體3(C3)、補(bǔ)體4(C4)存在顯著交互作用(P＜0.05）。高溫

5、下，添加大黃素組C3、C4顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。30℃大黃素組，TC顯著高于30℃對(duì)照組(P＜0.05)，與常溫對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果表明，飼料中添加25 mg/kg大黃素有助于緩解長(zhǎng)期高溫對(duì)團(tuán)頭魴血液生理的影響，提高免疫力，促進(jìn)魚(yú)體的生長(zhǎng)。
　　 2、高溫下大黃素對(duì)團(tuán)頭魴抗氨氮應(yīng)激及感染嗜水氣單胞菌的影響?zhàn)B殖結(jié)束后，對(duì)各組進(jìn)行連續(xù)14d氨氮應(yīng)激(10 mg/L)試驗(yàn)，分別于0d、2d、7d和14d采樣

6、，檢測(cè)團(tuán)頭魴血液和肝臟生化指標(biāo)，肝臟HSPs mRNA表達(dá)水平和頭腎超微結(jié)構(gòu)，并在14d應(yīng)激后進(jìn)行腹腔注射嗜水氣單胞菌攻毒試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)24h、48h、96h累計(jì)死亡率。結(jié)果表明:與氨氮應(yīng)激前相比，常溫對(duì)照組AST、UREA、葡萄糖、HSP60mRNA的表達(dá)水平在氨氮應(yīng)激2d后顯著升高，TG顯著下降（P＜0.05）;常溫對(duì)照組皮質(zhì)醇、T4、C4、HSP70 mRNA的表達(dá)水平在氨氮應(yīng)激7d后顯著升高，TC、HSP90 mRNA的表達(dá)水平顯著

7、下降(P＜0.05）。高溫對(duì)照組皮質(zhì)醇、T3、T4、AST、UREA、TG、TC、C3、C4、HSP60、HSP70 mRNA的表達(dá)水平均在氨氮應(yīng)激2d后顯著升高(P＜0.05）;高溫對(duì)照組HSP90 mRNA的表達(dá)水平在氨氮應(yīng)激7d后顯著下降(P＜0.05）。氨氮應(yīng)激14d后，高溫對(duì)照組葡萄糖和HDL-C以及常溫對(duì)照組C3顯著升高（P＜0.05）;常溫對(duì)照組LDL-C、一氧化氮(NO)顯著下降（P＜0.05）。兩種溫度下血漿皮質(zhì)醇、T

8、4、C4、HSP70在氨氮應(yīng)激后均顯著升高，且高溫組先于常溫組，可見(jiàn)，高溫下氨氮應(yīng)激魚(yú)類(lèi)生理指標(biāo)反映更為迅速。與對(duì)照組相比，大黃素顯著增加了氨氮應(yīng)激2d、7d后HSP60、HSP70、HSP90 mRNA的表達(dá)水平以及14d后HSP70、HSP90 mRNA的表達(dá)水平，降低了應(yīng)激7d后皮質(zhì)醇、活性氧(ROS)含量(P＜0.05)。頭腎超微結(jié)構(gòu)顯示，長(zhǎng)期慢性30℃高溫下頭腎細(xì)胞核出現(xiàn)輕微的萎縮，添加大黃素對(duì)頭腎細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。氨氮

9、應(yīng)激會(huì)引起頭腎細(xì)胞損傷，且隨著氨氮應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，損傷逐漸加重。氨氮應(yīng)激后各組感染嗜水氣單胞菌死亡率由高到低依次為25℃對(duì)照組、30℃對(duì)照組、30℃大黃素組、25℃大黃素組，表明較常溫下，高溫下氨氮應(yīng)激魚(yú)體更容易感染嗜水氣單胞菌，死亡率增加。飼料中添加大黃素可降低團(tuán)頭魴在氨氮應(yīng)激下病原菌感染的死亡率。
　　 本研究表明，氨氮應(yīng)激導(dǎo)致團(tuán)頭魴代謝、免疫、抗氧化等機(jī)能變化;飼料中添加25 mg/kg大黃素促進(jìn)了團(tuán)頭魴生長(zhǎng)，可提高團(tuán)頭魴