基于化學(xué)交聯(lián)與物理交聯(lián)的新型非病毒基因載體的研究.pdf

1、基因治療的難點是研發(fā)高效安全的基因載體。本研究過交聯(lián)技術(shù)制備兩種新型非病毒基因遞送系統(tǒng)。通過化學(xué)交聯(lián)與物理交聯(lián)將低分子量載體相互連接，提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低了細(xì)胞毒性。我們首先設(shè)計了基于二硫鍵交聯(lián)的嵌合多肽載體。將兩端含有半胱氨酸的短肽在雙氧水氧化下形成分子間二硫鍵，將短肽連接成高分子量的嵌合多肽載體。該嵌合多肽載體能夠有效包載壓縮質(zhì)粒DNA，防止被酶降解。在腫瘤細(xì)胞內(nèi)高還原性環(huán)境下迅速分解，促進(jìn)質(zhì)粒DNA的釋放提高轉(zhuǎn)染效率。在載體入胞

2、效率的實驗中發(fā)現(xiàn)交聯(lián)之后的嵌合多肽載體入胞能力顯著增強。我們測定了嵌合多肽載體的轉(zhuǎn)染效率并明確各組分在轉(zhuǎn)染過程中發(fā)揮的作用。將表達(dá)TRAIL的質(zhì)粒作為模型藥物，考察載藥復(fù)合物對于Hela細(xì)胞的藥效，并測定其對Hela細(xì)胞凋亡與周期的影響。體內(nèi)實驗中，我們考察了TRAIL/嵌合多肽載體復(fù)合物在裸鼠移植瘤模型中的轉(zhuǎn)染效率，并且評價了TRAIL/嵌合多肽載體復(fù)合物對于Hela細(xì)胞移植瘤的生長抑制作用。在第二部分報道了通過凍融法制備的物理交聯(lián)P

3、A-LA系列載體。我們將低代數(shù)的PAMAM樹狀分子與不同比例的LA反應(yīng)連接。測定了載體凍融前后的分子量，明確了交聯(lián)機理。評價了PA-LA載體凍融前后對于質(zhì)粒DNA包載能力的變化，以及復(fù)合物的粒徑電位等物理化學(xué)性質(zhì)。轉(zhuǎn)染實驗研究了LA修飾對于PA載體轉(zhuǎn)染效率的影響，以及PA自身代數(shù)大小對于轉(zhuǎn)染的影響。研究了凍融過程對于PA-LA轉(zhuǎn)染影響的規(guī)律性。通過以上研究工作我們開發(fā)了兩類制備簡單，效率高安全性好的新型非病毒基因載體。探索了載體各組分對