甲狀腺激素受體β新同功體TRβ△的初步研究.pdf

1、甲狀腺激素(thyroidhormone)通過與廣泛分布在各種組織中的甲狀腺激素受體(thyroidhormonereceptors,TRs)結合，作用于轉錄過程實現(xiàn)其對靶基因的正性/負性調節(jié)，對于機體的正常分化發(fā)育和代謝平衡具有十分重要的作用。TR存在主要兩種亞型：TRa和TRβ。TRβ又分TRβ1，TRβ2，TRβ3和TRβ△3等同功體。 在進行國家自然科學基金項目(30271154)關于TRβ基因的研究中，需要對大鼠TRβ

2、1受體cDNA進行克隆。TRβ1基因在多種組織中均有表達，其中肝臟、腦、骨胳肌、心臟、腎臟表達最多。取大鼠肝臟提RNA，以提取的RNAs為模板逆轉錄合成cDNA第一鏈。并以之為模板PCR擴增TRβ1雙鏈cDNA。將該cDNA插入pGEM-Teasy載體，并進行DNA序列分析。序列比較發(fā)現(xiàn)其與預期之TRβ1有很大不同，即在3'和5'兩端有同源性但在相當于兩個外顯子3和4序列之間多出一段本是內含子的108bp序列。此段序列并不是來源于變化點

3、(changingpoint)之前，而是來自于甲狀腺激素受體β基因3，4“共有”外顯子之間的非表達的內含子序列內，通過對其序列進行分析我們發(fā)現(xiàn)，此部分很可能是另外一種在變化點之后剪切方式所產生的新的mRNA或在內含子3，4之中還存在另一個外顯子。此意外發(fā)現(xiàn)的加長型的新的TR同功體mRNA在NCBI的GeneBank注冊時，獲準登記號為DO191165，命名此新同功體為TRβ△。此發(fā)現(xiàn)具有非常重要的科學意義：其一，目前發(fā)現(xiàn)的所有的九種TR

4、亞型中，沒有任何一種是加長型的，只有截短型的(△α1、△α2和△β3)，我們發(fā)現(xiàn)的這一個新亞型β△是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一一種加長型的TR亞型。其二，目前公認的TRβ基因中有一個變化點，其5'端的(即上游)部分在轉錄中的剪切方式是高度可變的，因此產生了β1、β2、β3、△β3四種T3受體亞型，而其3'端的部分在轉錄中在脊椎動物體內又是高度保守的，而本實驗中發(fā)現(xiàn)的新的改變恰好發(fā)生在變化點之后(下游)的外顯子3和4之間，因此對原有變化點是否存在提出

5、了新的質疑。第三，很可能在內含子3，4之內，存在一個過去被忽略而新被發(fā)現(xiàn)的一個新外顯子。TRβ的全基因組將要修正之。 通過軟件預測分析TRβ△與TRβ1的mRNA以及蛋白質在結構與功能上有什么不同。將編碼TRβ△的基因片段分別克隆到表達載體pQE-30Xa上，并轉化入E.coliM15[pREP4]，進行融合表達。Westernblotting鑒定重組蛋白。目的蛋白含6×His純化標簽，可以經金屬螯合親和層析吸附于Ni-NTA樹