牡蠣皰疹病毒感染魁蚶轉錄組測定及免疫相關基因分析.pdf

1、魁蚶（Scapharca broughtonii）又稱大毛蛤、赤貝、血貝，隸屬軟體動物門、瓣鰓綱、翼足亞綱、蚶目、蚶科、毛蚶屬。主要分布于西太平洋日本、韓國、中國沿海及俄羅斯東南部沿海。在中國，北起鴨綠江，南至廣西均有分布，其中以遼寧、山東資源最為豐富。多棲息在3~50米水深處，是一種營埋棲生活的冷水性大型雙殼貝類?？朗且环N優(yōu)質的高蛋白、低脂肪食品，其營養(yǎng)價值高，味道鮮美，具有良好的市場前景和開發(fā)利用價值。但隨著增養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，

2、其病害問題日益顯著。2012年、2013年大連、山東多處育苗場暴發(fā)魁蚶種貝大規(guī)模死亡事件，本實驗室從患病魁蚶體內分離出一種球形病毒，通過測序比對，證明其為牡蠣皰疹病毒(OsHV-1)。
　　本研究使用患病魁蚶組織制成病毒懸液進行感染實驗。感染實驗分為空白組，陰性懸液注射組和病毒懸液注射組，并使用實時定量PCR法對感染后魁蚶體內病毒的時空分布進行檢測。實驗結果表明，空白組和陰性懸液組魁蚶感染后未檢測到病毒粒子，病毒懸液注射組魁蚶經(jīng)人

3、工感染后，各部位組織中病毒含量都呈先上升再下降隨后又上升的趨勢，最終達到106拷貝/ng DNA左右。通過電鏡觀察，在感染魁蚶的鰓、肝胰腺、外套膜中出現(xiàn)細胞核染色質邊緣化甚至消失，細胞核腫脹、溶解，核仁消失，核膜擴張、不清晰，線粒體腫大，脊崩解，核糖體脫落等一系列細胞病理變化。在其細胞核和細胞質中均能發(fā)現(xiàn)大量直徑為90~110nm球形病毒粒子，該病毒粒子具囊膜，囊膜內可見均勻的高電子密度的核衣殼，與自然患病魁蚶負染電鏡中的病毒粒子形態(tài)相

4、同。研究結果表明，OsHV-1可以感染魁蚶并與魁蚶大規(guī)模死亡有直接相關關系。目前針對該病毒的致病性、流行規(guī)律已經(jīng)開展了相關研究，但是對于該病毒與魁蚶宿主間的相互作用機制的了解還很有限。本研究分別利用第三代測序技術 PacBio RSII平臺和第二代測序技術Illumina MiSeq平臺構建魁蚶轉錄組文庫。三代測序數(shù)據(jù)采用SMRT-Analysis Pipeline對所得序列進行分析，質控后共獲得85,127條reads，其中有46,2

5、65條全長cDNA轉錄本，全長read平均讀長為51,903bp。以魁蚶三代轉錄組測序組裝結果為參考序列，采用Trinity v2.1對所得序列進行de novo拼接，共獲得unigenes（>200bp）276,997條，N50長度為1.35kb，平均長度508bp。對拼接結果進行注釋，共74,529條序列獲得GO號。用二代測序結果對魁蚶轉錄本進行基因差異表達分析，獲得差異基因2998個，上調基因933個，下調基因2065個，篩選得到