銅綠微囊藻對羅氏沼蝦和大型溞毒性作用的研究.pdf

1、近年來，隨著環(huán)境污染的加重，水資源受到了嚴重的威脅，越來越多的淡水水體出現(xiàn)富營養(yǎng)化問題，同時伴隨而來的藍藻水華也已經(jīng)影響到了人們?nèi)粘Ｉa(chǎn)與生活用水的安全。微囊藻毒素(Microcysfins，MCs)作為藍藻細胞合成的二級代謝產(chǎn)物，是富營養(yǎng)化水體中因藍藻爆發(fā)而產(chǎn)生的最常見的藻毒素，具有強烈的肝毒性和腫瘤促進作用，尤其在發(fā)生微囊藻水華的水體中，生物多樣性明顯下降，對水生生物造成了較大的影響。枝角類浮游動物作為水生生態(tài)系統(tǒng)中物質(zhì)轉(zhuǎn)化和能量傳

2、遞的重要環(huán)節(jié)，在維持水體生態(tài)系統(tǒng)平衡方面有著至關(guān)重要的作用，如果其生長和繁殖受到微囊藻的影響將會影響到整個生物鏈的正常運轉(zhuǎn)。本文將從枝角類大型潘(Daphniamagna)的生長、繁殖、存活以及種群變化的角度去探討銅綠微囊藻的毒性作用。作為淡水養(yǎng)殖的主要品種，羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)的生長和發(fā)育也會受到微囊藻影響，并可能引起肝胰腺等內(nèi)部器官的病理變化、導致蝦體的氧化損傷等。本文就這一問題，針對銅綠微囊

3、藻(Microcystisaeruginosa)對羅氏沼蝦存活、生長、組織器官的損傷進行研究。
　　 微囊藻毒素檢測方法的建立及微囊藻中毒素含量的測定。在實驗室環(huán)境下培養(yǎng)銅綠微囊藻，以其作為實驗用藻。依據(jù)高效液相色譜液-質(zhì)譜(HPLC-MS)聯(lián)用技術(shù)在生物毒素檢測分析上的優(yōu)勢，結(jié)合微囊藻的形態(tài)特征，建立起了一套較為穩(wěn)定的HPLC-MS檢測MCs的方法。能夠快速準確的對銅綠微囊藻溶液中含有的微量毒素進行檢測。經(jīng)過檢測，確定了實驗室

4、培養(yǎng)的銅綠微囊藻所含微囊藻毒素的主要種類為MC-LR，且其含量為0.3fmol/cell。在這一檢測方法的基礎上，我們根據(jù)水生動物組織所具有的特點，通過改進得到了一套能夠穩(wěn)定、準確檢測組織內(nèi)MCs的方法，為今后的檢測分析工作提供理論依據(jù)和技術(shù)指導。
　　 為探索銅綠微囊藻對大型潘的生長和繁殖影響，實驗將大型溞暴露于濃度為1.5×106，3×106，0.75×107和1.5×107cell/ml的微囊藻溶液中，實驗中觀察到大型溞攝

5、食銅綠微囊藻的現(xiàn)象，得到96h銅綠微囊藻對大型溞半致死濃度(LD50)為1.752×107cell/ml，表明銅綠微囊藻對大型溞有很強的急性毒性。另外還發(fā)現(xiàn)，銅綠微囊藻對大型溞的體長、壽命、產(chǎn)卵數(shù)和種群數(shù)量都有影響，且抑制作用的大小與微囊藻細胞密度正相關(guān)。
　　 本文采用靜水式生物測試法研究銅綠微囊藻對羅氏沼蝦的毒性影響。將體長10.33±1.44mm的羅氏沼蝦幼體暴露于濃度為1×106，5×106，10×106，20×106和

6、30×106cell/ml的銅綠微囊藻溶液中，在水溫25℃下，發(fā)現(xiàn)高濃度銅綠微囊藻溶液對沼蝦具有毒害作用，致使沼蝦死亡，同時也得到了144和168h的半致死濃度(LD50)，分別為36.08×106和28.81×106cell/ml。
　　 在急性毒性實驗的基礎上，進一步研究了銅綠微囊藻對羅氏沼蝦生長的影響。體長為8.1±0.58mm的羅氏沼蝦，在濃度為2×106，10×106cell/ml的銅綠微囊藻溶液中持續(xù)飼養(yǎng)80d，隨著

7、時間的延長生長速率變慢，與對照組的差異顯著(P<0.05)。另外還對暴露在銅綠微囊藻溶液中的沼蝦進行了組織學觀察。與對照組相比，實驗組沼蝦鰓絲明顯增粗，鰓絲組織受到部分損傷，說明銅綠微囊藻在影響沼蝦生長的同時對羅氏沼蝦的組織器官也造成了損傷。
　　 借助已經(jīng)得到的結(jié)果，主要針對易受損器官，進一步研究了微囊藻毒素在組織器官的累積。將羅氏沼蝦在3×106cell/ml的藻液中飼養(yǎng)45d，使用HPLC-MS法檢測肝胰腺、肌肉、眼柄、心