UHRF2在羥基脲所致的DNA損傷應答中的作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究 UHRF2與羥基脲所致的 DNA損傷之間的聯(lián)系，以及UHRF2在羥基脲所致的 DNA損傷應答中分別與 p53、p21及 H3K9乙?；g的相關性。進一步探討UHRF2的生物學功能。
　　方法：體外培養(yǎng)HEK293細胞，構建羥基脲（HU）所致的DNA損傷細胞模型；分別轉染pCMV-Flag-NIRF質粒及UHRF2-siRNA，采用免疫印跡（ western blot）及 RT-PCR法檢測 pCMV-Flag-NIR

2、F及UHRF2-siRNA在HEK293細胞中的表達情況；運用單細胞凝膠電泳檢測UHRF2與羥基脲誘導的DNA損傷之間的關系；通過免疫印跡法檢測DNA損傷應答過程中內源性UHRF2的表達情況；利用免疫印跡檢測UHRF2在DNA損傷應答中對p53、p53下游基因p21及H3K9乙酰化(H3K9ac)的影響；CCK8及流式細胞術檢測UHRF2在DNA損傷應答中對細胞周期及增殖的影響。
　　結果：與對照組相比，實驗組的HEK293細胞經

3、2.5mmol/L羥基脲處理12h后，DNA出現(xiàn)了明顯的損傷，與24h處理組相比無明顯差異；HEK293細胞內轉染 pCMV-Flag-NIRF質粒及 UHRF2-siRNA后，UHRF2發(fā)生了顯著變化；UHRF2上調后 DNA拖尾明顯變短(p＜0.01)；p53、p21及H3K9乙?；鞍椎牧匡@著增加(p＜0.05)，細胞增殖明顯減慢且G1期細胞增加（p＜0.01）；UHRF2下調后DNA損傷應答中P53、P21及H3K9乙?；鶞p少

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