C反應(yīng)蛋白在2型糖尿病伴慢性牙周炎中作用機(jī)制初探.pdf

1、研究背景:
　　 牙周炎是由牙菌斑微生物引起的感染性疾病,可導(dǎo)致牙齦炎癥、牙周袋形成、進(jìn)行性牙周附著喪失和牙槽骨破壞。雖然牙菌斑是牙周炎發(fā)病的始動因子,但是單從菌斑微生物角度不足以解釋疾病嚴(yán)重程度的差異。越來越多證據(jù)表明某些危險因素(如系統(tǒng)性疾病和遺傳因素)并不直接導(dǎo)致牙周炎的發(fā)生,而是影響其嚴(yán)重程度。已有研究表明,糖尿病患者患牙周炎的風(fēng)險明顯高于健康人。
　　 糖尿病是一種多病因的代謝性疾病,其中2型糖尿病是主要類型,

2、臨床上多見于35～40歲以后,占所有糖尿病的90％～95％。長期以來,胰島功能損傷和胰島素抵抗一直被認(rèn)為是2型糖尿病發(fā)病的兩個關(guān)鍵因素,但近年來的研究認(rèn)為2型糖尿病是機(jī)體天然免疫系統(tǒng)啟動的細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),炎癥在2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制中起媒介作用。
　　 目前研究已證實(shí)炎癥在胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞損傷的發(fā)生過程中起重要作用；而炎癥在牙周炎進(jìn)展中的作用已得到充分肯定。C反應(yīng)蛋白(CRP)是臨床上廣泛使用的炎癥標(biāo)志物之一,它已被

3、證實(shí)與牙周炎和糖尿病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。研究表明:牙周炎可引起血清CRP濃度升高,其嚴(yán)重程度與血清CRP濃度呈正相關(guān)；CRP又是2型糖尿病的重要預(yù)測因子。血清CRP水平升高是牙周炎和糖尿病的共性反應(yīng),它為探究二者內(nèi)在聯(lián)系開啟了新的領(lǐng)域。那么CRP是牙周炎影響全身健康的“交通使者”呢?還是僅僅在糖尿病性牙周炎的發(fā)生發(fā)展中作為炎癥反應(yīng)標(biāo)志物而存在呢?
　　 C反應(yīng)蛋白是一種急性時相蛋白,在細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF—α、干擾素

4、、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF—β)等誘導(dǎo)下主要由肝臟細(xì)胞合成,外周血淋巴細(xì)胞也可少量產(chǎn)生。在組織受到損傷、感染或腫瘤破壞時,血清CRP濃度可以在數(shù)小時內(nèi)急劇上升,病情改善后可逐漸下降,至恢復(fù)正常。它可增強(qiáng)白細(xì)胞反應(yīng)性、補(bǔ)體的固定及炎癥部位細(xì)胞碎片的清除,具有免疫識別特性及免疫調(diào)節(jié)功能,是亞臨床系統(tǒng)感染的一項(xiàng)敏感性指標(biāo)。
　　 研究發(fā)現(xiàn)遺傳和環(huán)境因素共同影響CRP水平,其中遺傳因素可解釋個體間CRP水平差異的35％～40％。多群體的大

5、樣本研究表明CRP基因多態(tài)性與其血清基線水平顯著相關(guān)。目前,已發(fā)現(xiàn)將近40種CRP單核苷酸多態(tài)性,部分SNPs或其單倍型已被證實(shí)與血漿CRP水平有相關(guān)性。而CRP基因多態(tài)性與系統(tǒng)性疾病的相關(guān)研究中涉及較多的是其與心血管類疾病間的相關(guān)關(guān)系。C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與糖尿病和牙周炎的研究相對匱乏。
　　 本研究通過檢測CRP和HbAlc基線水平及CRP基因多態(tài)性的分布,探討CRP基因多態(tài)性與2型糖尿病伴慢性牙周炎人群血清CRP和HbAl

6、c基線水平的相關(guān)性:通過分析CRP SNPs與牙周基礎(chǔ)治療前后該人群CRP與HbAlc水平的縱向改變的相關(guān)性,探討不同遺傳背景的牙周炎患者對牙周基礎(chǔ)治療的反應(yīng)性與敏感性差異。
　　 第一章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與血清C反應(yīng)蛋白基線水平的相關(guān)性研究
　　 目的:
　　 檢測中國廣州漢族2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中血清CRP水平及CRP基因多態(tài)性的分布；探討CRP基因多態(tài)性與該人群血清CR

7、P基線水平的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 本章共納入135名受試者,均來自廣州市三級甲等醫(yī)院門診在2008年9月至2009年9月期間的門診病人。納入標(biāo)準(zhǔn):①糖尿病確診1年以上,糖尿病病情穩(wěn)定,用藥2個月內(nèi)無變化,無嚴(yán)重并發(fā)癥；②患有慢性牙周炎,全口存留≥16顆牙齒,且未經(jīng)過系統(tǒng)牙周治療,1年內(nèi)未接受過潔治。排除標(biāo)準(zhǔn):①患有影響牙周健康的其他系統(tǒng)性疾病,如冠心病等；②除牙周炎外,身體其他部位存在活動性炎癥；③調(diào)查前4周內(nèi)服

8、用抗生素；④妊娠期、哺乳期或治療期間計(jì)劃懷孕；⑤拒絕參加本研究。所有受試者于早晨8～10點(diǎn)間采集空腹靜脈血,檢測血清高敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)濃度。
　　 采用基因組DNA試劑盒提取所有受試者的外周血DNA。采用直接測序法和多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR—RFLP)法測定C反應(yīng)蛋白CRP-757 T>C,-717 A>G,-409 G>A,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T位點(diǎn)的基因型,檢

9、測2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP各基因型。
　　 采用Kruskal Wallis檢驗(yàn)和Mann—Whitney檢驗(yàn)分析CRP各位點(diǎn)不同基因型間CRP濃度的差異。如果有差異,則根據(jù)hsCRP的中位數(shù),把研究對象分為兩組,通過x2檢驗(yàn)分析兩組間等位基因頻率的差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.CRP SNPs Hardy-Wainberg平衡檢驗(yàn)
　　 CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C

10、>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T各位點(diǎn)基因型頻率在本研究人群中分布符合Hardy—weinberg平衡(P>0.05)
　　 2.CRP基因型及等位基因在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中的分布
　　 CRP各位點(diǎn)主要基因型:-757 T>C的TT基因型；-717 A>G的AA基因型；-286 C>A>T的CC基因型；+1059 G>C的GG基因型；+1444 C>T的CC基因型。-409 G>A位點(diǎn)只檢測到G

11、G一種基因型；+1059 G>C未發(fā)現(xiàn)CC基因型。
　　 3.CRP基因各位點(diǎn)間的連鎖不平衡分析
　　 在本研究2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中-286 C>A>T和-757 T>C存在較強(qiáng)的連鎖不平衡(r2=0.648)。
　　 4.CRP基因各位點(diǎn)間的單倍型分析
　　 本研究中發(fā)現(xiàn)5種有效單倍型(CAAGC,TACCC,TACGC,TATGT和TGCGC)其中TACGC(占51.0％)是主要的單倍型。

12、r>　　 5.CRP基因多態(tài)性與血清CRP基線水平的相關(guān)性
　　 CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T這三種多態(tài)性不同基因型間的血清CRP濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其余兩基因多態(tài)性+1059 G>C和+1444 C>T不同基因間的血清CRP濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 高濃度hsCRP(>50％)組-757 T>C C等位基因,-717 A>G的A等位基因和-286 C>A>T

13、的A等位基因的攜帶率顯著高于低濃度hsCRP組。
　　 第二章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與HbAlc基線水平相關(guān)性的研究
　　 目的:
　　 探討中國廣州漢族2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與HbAlc基線水平的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 研究對象、CRP基因型的檢測同第一章。
　　 所有受試者檢測HbAlc水平。采用Kruskal Wallis檢

14、驗(yàn)和Mann—Whitney檢驗(yàn)分析CRP各位點(diǎn)不同基因型間HbAlc基線水平的差異。
　　 結(jié)果:
　　 本研究中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444C>T不同基因型間HbAlC基線水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 第三章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與牙周基礎(chǔ)治療后血清CRP水平變化的相關(guān)性研究
　　 目的:<

15、br>　　 初步探討中國廣州漢族人群2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP基因多態(tài)性與牙周基礎(chǔ)治療后hsCRP水平變化的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 本章納入90例患者在基線時接受牙周非手術(shù)治療,包括口腔衛(wèi)生宣教(OHI)、全口潔刮治、根面平整、調(diào)牙合、拔除無法保留的患牙；在3個月和6個月時行牙周維護(hù)治療,包括口腔衛(wèi)生宣教及常規(guī)齦上下潔刮治。6個月復(fù)診時再次檢測血清hsCRP水平。CRP基因型分析同第一章。
　　

16、采用Kruskal Wallis檢驗(yàn)和Mann—Whitney檢驗(yàn)分析CRP各位點(diǎn)不同基因型與牙周基礎(chǔ)治療前后hsCRP水平變化的差異。
　　 結(jié)果:
　　 本研究中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444C>T不同基因型間hsCRP水平變化的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 第四章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中
　　 C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與牙

17、周基礎(chǔ)后療后HbAlc水平變化的相關(guān)性研究
　　 目的:
　　 初步探討中國廣州漢族人群2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP基因多態(tài)性與牙周基礎(chǔ)治療后HbAlc水平變化的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 CRP基因型的檢測及牙周非手術(shù)治療同第一章。
　　 6個月復(fù)診時再次檢測HbAlc血清水平。
　　 采用Kruskal Wallis檢驗(yàn)和Mann—Whitney檢驗(yàn)分析CRP各位點(diǎn)不同基因型與

18、牙周基礎(chǔ)治療前后HbAlc水平變化的差異。
　　 結(jié)果:
　　 本研究中CRP+1444 C>T位點(diǎn)不同基因型間HbAlc水平變化的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,TT+TC基因型攜帶者的HbAlc水平的變化較大。
　　 -757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T和+1059 G>C位點(diǎn)不同基因型間HbAlc水平變化的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 全文總結(jié):
　　 1、中國漢族2型糖尿

19、病伴慢性牙周炎人群中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T多態(tài)性與血清CRP基線水平相關(guān)；-757 T>C C等位基因,-717 A>G的A等位基因,-286 C>A>T的A等位基因與高水平CRP相關(guān)。
　　 2、2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP+1444 C>T位點(diǎn)多態(tài)性與牙周基礎(chǔ)治療后HbAlc水平的變化有關(guān),TC+TT基因型攜帶者對牙周基礎(chǔ)治療反應(yīng)較敏感。
　　 3、尚不能認(rèn)為2型糖尿病伴慢

20、性牙周炎患者CRP+1059 G>C,+1444 C>T位點(diǎn)多態(tài)性與血清CRP基線水平有關(guān)。
　　 4、尚不能認(rèn)為2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T位點(diǎn)多態(tài)性與HbAlc基線水平有關(guān)。
　　 5、尚不能認(rèn)為2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C