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文檔簡介
1、黃芪在我國藥用歷史悠久,藥用價值極高,《藥典》收載有蒙古黃芪和膜莢黃芪兩個種。山西恒山及其周邊地區(qū)為蒙古黃芪的道地產區(qū),是我國為數不多的保存了黃芪傳統(tǒng)生長模式的地區(qū)。傳統(tǒng)芪較高的藥用價值自古以來就被中醫(yī)臨床所證明,然而發(fā)展至今,由于生長周期長和較高的成本,其國內市場漸漸地被興起的“移栽”芪所搶占,主要原因之一是傳統(tǒng)芪現(xiàn)存市場交易的商品規(guī)格等級標準是否與質量相關尚不清楚,更無法直接對比評價兩種不同種植模式黃芪的質量差異。對于傳統(tǒng)黃芪而言,
2、不同生長年限會對黃芪的質量產生哪些影響尚不完全清楚;雖然已明確黃芪根是主要藥用部位,但根的不同部位化學成分分布是否相同,也不清楚。另外,黃芪市場僅從規(guī)格大小劃分黃芪等級,這種劃分方式是否科學,也未得到證明。面對這些疑問,實際上就是要解決“辨狀論質”的科學內涵,建立中藥材的外觀性狀、化學成分和生物效應相結合的質量評價體系。面對市場上形形色色的黃芪藥材商品,“性狀”首先是作為區(qū)分質量以及商品定價的依據,對于傳統(tǒng)道地黃芪而言,它們有生長年限的
3、差異,這種差異不僅體現(xiàn)在不同黃芪植株上,也體現(xiàn)在同一黃芪的不同部位上。分析研究傳統(tǒng)芪中化學成分的積累規(guī)律和分布規(guī)律,不僅對于評價傳統(tǒng)黃芪的質量非常重要,而且對于黃芪等級的區(qū)分,以及提供科學的證據為市場實行優(yōu)質優(yōu)價的交易,也起到十分重要的作用。
目的:黃芪中的皂苷和黃酮類成分已被證明是主要活性成分,但黃芪皂苷成分的提取分離過程較為繁瑣,其最終含量是溶液堿化后多種皂苷水解生成黃芪甲苷的最終含量,其含量不僅容易受到溶液堿化程度的影響
4、,且由于其特殊的分布部位和現(xiàn)今對于該類成分檢測技術的不完善,其含量還受到黃芪的加工方式及儀器穩(wěn)定性的影響。本文主要建立黃芪取樣和皂苷類成分含量測定標準化操作規(guī)程,為黃芪質量評價提供方法基礎;闡明生長年限對黃芪指標成分的積累規(guī)律,為制定黃芪適當的生長采收年限提供科學依據;明確黃芪主側根、上下根段以及根的內外部位化學成分的分布規(guī)律,為制定黃芪產地加工規(guī)程和建立科學的商品規(guī)格標準提供依據。
方法:制定建立從采收到加工,命名全套控制流
5、程,重點對皂苷成分進行分析規(guī)范,探討了三種主要影響因素,建立標準操作規(guī)程;采用HPLC-UV-ELSD串聯(lián)同時測定12種成分(8種黃酮:1.毛蕊異黃酮葡萄糖苷;2.芒柄花苷;3.(6aR,11aR)-9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷;4,7,2'-二羥基-3',4'-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷;5.毛蕊異黃酮;6.芒柄花素;7.3-羥基-9,10-二甲氧基紫檀烷;8.7,2'-二羥基-3',4'-二甲氧基
6、異黃烷;4種皂苷:分別是黃芪皂苷Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ和Ⅰ)。色譜條件:參考課題組建立的方法,最終的洗脫條件為流動相為乙腈(A)-水(B),體積流量1.0mL/min,蒸發(fā)光檢測器參數:空氣泵壓力為0.5MPa,氣體流速為2.5L/min,漂移管加熱溫度設為105℃,增益值為1.0,Venusil MP C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),紫外檢測波長230nm,柱溫25℃,進樣量20μl。梯度洗脫:0-8min,20%A;8-15mi
7、n,30%A;15-30min,43%A;30-40min,60%A;40-50min,100%A;50-60min,100%A;60-66min,20%A。進行方法學考察,結果穩(wěn)定可靠,得到樣本測定數據;采用偏最小二乘判別分析、貝葉斯判別分析、聚類分析、相關分析、相似度評價和因子分析等數據統(tǒng)計分析方法,研究了不同生長年限黃芪中指標成分的積累規(guī)律和指標成分在根中不同解剖部位、上下和內外部位的分布規(guī)律。采用相關分析和綜合評價的方式分析探討
8、了黃芪外觀性狀與指標成分之間的關聯(lián)。
結果:1.黃芪蘆頭直徑和根的長度的平均值與生長年限呈正相關。
2.黃芪藥材的粉碎程度對含量測定影響表現(xiàn)在兩方面:一是粉末取樣均勻性,二是藥材的提取效率。
3.黃酮類成分對照品性質穩(wěn)定;黃芪皂苷Ⅰ在4℃存儲條件下緩慢水解為皂苷Ⅱ,而皂苷Ⅱ很少水解成皂苷Ⅳ。
4.在同一檢測條件下,紫外檢測器對同一濃度、同一種物質,具有穩(wěn)定的響應信號值,而蒸發(fā)光檢測器的響應信號值容
9、易波動變化。
5.黃芪中總黃酮和總皂苷均在生長不到一年的時間內就達到平均水平,此后總黃酮含量隨著生長年限的積累波動變化,其中生長4年的黃芪總黃酮積累量達到最高;除3年生黃芪外,皂苷含量隨著生長時間的延長含量逐漸降低,3年生黃芪總皂苷的含量達到峰值。
6.一株黃芪上下段生長時間不同,按絕對年限能夠將不同組的黃芪樣本區(qū)分開,不同全植株黃芪中總黃酮和總皂苷的積累量也有明顯差異,說明總黃酮和總皂苷確實與生長年限密切相關。
10、r> 7.12種指標成分可以分成3大類,他們之間具有不同的積累和分布規(guī)律。
8.一株黃芪側根與主根總黃酮含量無差異,側根總皂苷含量顯著高于主根;主根和側根的內部生長發(fā)育過程可能有所差異。
9.黃芪中皂苷80%以上分布在表皮,只有不到20%分布在其它解剖部位;黃酮類成分在木質部、韌皮部和表皮均有分布,且以木質部居多,但含量差異不大。
10.一株黃芪由蘆頭(上端)至根尖(下端)黃酮苷類成分分布與生長年限密切相
11、關;黃烷和皂苷類成分含量都是逐漸升高,但以一株黃芪的中間偏下的位置有穩(wěn)定的較高含量。其中黃烷類成分上下含量極不均勻。
11.傳統(tǒng)芪黃酮苷含量與密度正相關;總皂苷含量與規(guī)格大小負相關;形狀為鞭桿型的黃芪往往具有較高的總黃酮和總皂苷,圓柱型黃芪總黃酮和總皂苷含量最低,其次是生長年限較長的多叉型黃芪,直根型黃芪總黃酮和總皂苷含量居于這幾種形狀之間。
結論:建立的皂苷類成分檢測規(guī)范及多指標成分測定方法可靠;恒山黃芪藥材化學成
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