重組大腸桿菌(BL21)產(chǎn)海藻糖合酶過(guò)程優(yōu)化.pdf

1、海藻糖是一種特殊的二糖，具有良好的生物學(xué)功能，有較好的保濕功能、抗干旱功能、耐滲透壓等性質(zhì)，因此在食品、醫(yī)藥、化妝品、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，并具有較好的安全性。目前有海藻糖葡糖基轉(zhuǎn)移合成酶（呦TreT）途徑、海藻糖合酶（TreS）途徑、6-磷酸海藻糖合成酶/6-磷酸海藻糖磷酸酯酶（TPS/TPP）途徑和麥芽寡糖基海藻糖合成酶/麥芽寡糖基海藻糖水解酶（TreY/TreZ）途徑是被發(fā)現(xiàn)的生成海藻糖的途徑，其中TreS途徑被認(rèn)為是最具優(yōu)勢(shì)的

2、途徑，因?yàn)楹Ｔ逄呛厦改軌驅(qū)r(jià)格低廉的麥芽糖通過(guò)一步反應(yīng)轉(zhuǎn)化生成海藻糖，成本低，工藝簡(jiǎn)單，而且符合工業(yè)生產(chǎn)設(shè)計(jì)。
　　研究表明，海藻糖合酶原始菌株產(chǎn)酶少，相對(duì)酶活低，不能滿足工業(yè)化設(shè)計(jì)要求，因此通過(guò)基因工程技術(shù)手段，將獲取的海藻糖合酶基因克隆并進(jìn)行異源表達(dá)，這種方法已成為獲得海藻糖合酶的一種重要方式，更加有利于海藻糖合酶的獲得。在以往的研究報(bào)道中，有許多的來(lái)自不同菌種的海藻糖合酶基因因被克隆，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中得到了表達(dá)，進(jìn)而獲得了

3、海藻糖合酶。但研究發(fā)現(xiàn)相關(guān)報(bào)道所構(gòu)建的重組大腸桿菌很少應(yīng)用于規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。
　　本文構(gòu)建了海藻糖合酶基因質(zhì)粒載體 pET22b-tres，并被轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Escherichia coliBL21（DE3）中進(jìn)行高效的的表達(dá)。用乳糖誘導(dǎo)重組菌的表達(dá)，通過(guò)研究確定最適濃度為4g/L，重組菌中海藻糖合酶的表達(dá)量占總蛋白的比重較高。使用 Ni柱對(duì)重組海藻糖合酶粗酶液進(jìn)行純化，得到純酶液，并對(duì)其進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)的研究，結(jié)果表明該海藻糖合酶在